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猪丁型冠状病毒的分离鉴定

2021-06-17陈奕帆邱文英张丽燕孙继海郝伟伟严应海

养猪 2021年3期
关键词:检测

陈奕帆,邱文英,张丽燕,孙继海,郝伟伟,严应海

(1.华派生物工程集团有限公司,四川 成都 641402;2.简阳市十里坝街道办事处社区事务服务中心,四川 简阳 641400)

PDCoV(猪丁型冠状病毒)属于套式病毒目、冠状病毒科、δ冠状病毒属,是近年来发现的一种新型猪肠道病病原。PDCoV是有囊膜的单股正链RNA病毒,基因组长约25.4 kb,其构成和排列顺序为5'UTR-ORF1a-ORF1b-S-E-M-N-3'UTR[1-2]。其中,S基因编码的S蛋白含有1 159或1 160个氨基酸残基,以三聚体形式聚集于病毒囊膜的表面,主要参与病毒与宿主细胞的吸附和融合,同时也是诱导机体产生中和抗体的主要抗原蛋白[3-4]。最早于2012年由Woo等从中国香港收集的猪粪便拭子中检测到,随后国内研究学者贺东生等从严重腹泻的新生仔猪小肠病料中检测到PDCoV,且有证据显示2004年前国内不同地区的猪群中已存在PDCoV[2,5-6]。PDCoV可感染各种年龄段的猪群,但对新生仔猪的危害最大,感染率最高,引起的死亡率约为30%~40%[7]。感染仔猪临床表现为水样腹泻、呕吐、脱水,剖检病理结果显示肠壁变薄,变透明,肠内充斥着大量黄色液体,组织病理学变化主要见于空肠中、远端和回肠,十二指肠和空肠近端的病变不明显,病变主要表现为肠绒毛上皮细胞萎缩、坏死,同时退化的肠上皮细胞进入管腔[8]。PDCoV导致的临床症状和病理学变化与猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea,PED)或猪传染性胃肠炎(Transmissible Gastroenteritis,TGE)相似,且常伴随混合感染的情况,对于PDCoV的鉴别诊断需要借助实验室手段。

本研究利用特异性的RT-PCR方法对收集的6份病料进行检测,对确认为PDCoV 阳性的病料进行病毒的分离,并通过CPE、RT-PCR及S基因序列测定分析对分离的病毒进行鉴定,旨在为进一步开展PDCoV生物学特性研究和疫苗研制奠定基础。……

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