廖 帆，杨雅娣，谭 磊

（湖南农业大学动物医学院，湖南 长沙 410128）

猪流行性腹泻（Porcine Epidemic Diarrhea,PED）是严重影响我国养猪业发展的肠道传染病，由猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV）引起，该病具有急性和高度接触性等特点[1]。仔猪感染PEDV后可表现严重的临床症状，如呕吐、消瘦和持续性腹泻等，并出现高死亡率。近来年，PED仍然是导致我国仔猪腹泻的主要肠道病原之一，大部分猪场暴发PED由PEDV变异株感染所致，少数则由PEDV传统株感染引起，使得目前我国PED的防控较为严峻[2]。由于发病仔猪在短时间内会出现死亡，对PED进行及时而准确的诊断对该病的防控极为重要，本次研究采用RT-PCR技术对某规模化猪场疑似感染PEDV的仔猪肠道组织进行病原诊断，并对PEDV毒株的ORF3基因序列进行扩增与分析，确定导致仔猪发病的PEDV毒株类型，为相应的防控措施制定提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 病料来源

12份样品来源于湖南省某规模化猪场，该场于2018年9月初暴发腹泻，样品均为带有腹泻症状的仔猪肠道组织及其内容物。

1.2 试验材料

Trizol Regent购买于美国赛默飞公司；反转录相关试剂购自于美国Promega公司；PCR试剂及DNA marker分别购自于长沙擎科生物有限公司和北京全式金生物有限公司；其它耗材购自于深圳华大基因股份有限公司；PCR仪购自于美国ABI公司；不同规格移液器和低温冷冻离心机等购自于美国。参考文献[3]合成ORF3基因扩增引物，引物由长沙擎科生物科技有限公司合成。

1.3 样品的处理及组织RNA提取

取1.0 g左右组织样品，剪碎，置于2.0 mL的离心管中，加入适量生理盐水后匀浆，其后反复冻融3次，低温高速（12 000 r/min）离心15 min，取上清液。……