◎ 王文敏，卢 姗

（广东产品质量监督检验研究院，广东 佛山 528300）

有机氯农药是一大类含有氯原子的有机杀虫剂，有机氯农药有广谱、高效、急性毒性低、价格低廉等特点，曾经在全世界范围内大量使用。但由于这类农药脂溶性高，在自然环境中难以降解，所以在食品中的残留及其对人体健康的危害不容忽视[1]。茶叶中茶多酚、咖啡碱、多糖等有效成分具有抗癌、抑制心血管疾病、延缓衰老、抑制和抵抗病毒等功效，因此饮茶有益于身体健康[2]。由于茶叶样品基质复杂，含有大量的色素和杂质等，严重干扰提取液中农药残留的检测，因此，前处理技术对茶叶中农药残留提取、分离及检测有非常重要的意义[3]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

茶叶，为产自云南西双版纳的普洱茶（大益茶）。

5种有机氯农药标准品：α-666（CAS：319-84-6）、七氯（CAS：76-44-8）、艾氏剂（CAS：309-00-2）、狄氏剂（CAS：0-57-1）和异狄氏剂（CAS：72-70-8）。石油醚、乙酸乙酯、环己烷、丙酮、乙醚和正己烷，均为分析纯，且均为广州化学试剂厂生产。

1.2 仪器与设备

试验的主要仪器设备见表1。

表1 主要仪器设备表

1.3 仪器条件

（1）色谱条件。Rxi-5ms色谱柱：0.25 μm×30.0 m×0.25 mm；进样口温度：280 ℃；分流方式：不分流进样，1 min后打开分流阀；载气：氦气（He）；流量控制方式：恒线速度；线速度：46.7 cm·s-1；吹扫流量：3.0 mL·min-1；分流比（R）5∶1。升温程序：80 ℃起始，以15 ℃·min-1升温到200 ℃，保持3 min，继续以15 ℃·min-1升温到280 ℃，保持5 min。

（2）质谱条件。EI源，离子源温度（I）：200 ℃，接口温度（I）：280 ℃，选择离子扫描模式（SIM）。

1.4 样品前处理

茶叶（干样）经粉碎后取5 g（精确至0.01 g）[4]于50 mL离心管。加入25 mL提取液，超声波提取30 min，于高速冷冻离心机内离心 5 min，7 000 r·min-1。过滤于茄形瓶内，残渣重复提取一次，超声15 min，离心，过滤，合并提取液。提取液于旋转蒸发仪，浓缩至1～2 mL，用提取溶液转移至10 mL离心管（转移3～4次），再用提取溶液定容至2 mL，待上样。先后经过ENVI-Carb柱和Florisil柱净化。净化液供气相色谱-质谱分析。

1.5 样品前处理方法优化

1.5.1 样品提取

对提取液的选择进行实验，分别用25 mL的乙腈、石油醚-丙酮（4+1）、正己烷-丙酮（2+1）、乙酸乙酯-丙酮（3+1）和石油醚-乙酸乙酯（1+1）作为提取溶剂，对茶叶中的有机氯组分进行提取，提取液供气相色谱检测。

1.5.2 样品净化

净化方法选择固相萃取。净化柱的选择：①去除色素。茶叶样品经提取有机氯组分后，提取液颜色呈墨绿色，糊状，但经ENVI-Carb固相萃取柱净化后呈透明液体状，因此本实验采用乙酸乙酯-丙酮（1∶1）淋洗ENVI-Carb固相萃取柱净化作为色素净化手段。②去除杂质。采用Florisil固相萃取小柱试验重现性好，能有效去除杂质，简化操作步骤，减少溶剂的使用量，快速、简单。因此，本实验采用Florisil固相萃取小柱净化作为去除杂质的净化手段。

（1）ENVI-Carb柱最优洗脱体积的选择。用5 mL环己烷活化石墨化碳黑柱（ENVI-Carb），取2 mL标准工作液上样，分别用2 mL、3 mL、4 mL、5 mL丙酮-乙酸乙酯（1+1）溶液洗脱，下接10 mL离心管，氮吹至近干，用石油醚定容至2 mL。供气相色谱-质谱分析。

（2）对Florisil柱最优洗脱溶剂的选择。用5 mL石油醚活化弗罗里硅土柱（Florisil），2 mL标准工作液上样，分别用5 mL乙酸乙酯-石油醚（5+95）、乙酸乙酯-丙酮（1+1）、乙醚-正己烷（1+4）、正己烷-乙酸乙酯（9+1）和丙酮-正己烷（1+1）溶液洗脱，下接10 mL离心管，氮吹至近干，用石油醚定容至2 mL。供气相色谱-质谱分析。

（3）对Florisil柱最优洗脱体积的选择。用5 mL石油醚活化弗罗里硅土柱（Florisil），2 mL标准工作液上样，分别用2 mL、3 mL、4 mL、5 mL和6 mL最优洗脱溶剂洗脱，下接10 mL离心管，氮吹至近干，用石油醚定容至2 mL。供气相色谱-质谱分析。

2 结果与分析

2.1 线性回归方程和相关系数

将有机氯标准储备液配制成 0 μg·L-1、25 μg·L-1、50 μg·L-1、200 μg·L-1、500 μg·L-1、1 000 μg·L-1和2 000 μg·L-1标准品工作液，按选定的色谱-质谱条件进样，以吸收峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，结果如表2所示，5种有机氯农药质量浓度和响应值线性关系良好。

表2 标准曲线、线性范围及检出限表

2.2 提取液的选择

经过用乙腈、石油醚-丙酮（4+1）、正己烷-丙酮（2+1）、乙酸乙酯-丙酮（3+1）、石油醚-乙酸乙酯（1+1）作为提取溶剂进行对比实验发现，经石油醚-乙酸乙酯（1+1）溶液提取的杂质峰较少，提取的有机氯组分重现性高。故本实验的提取液选定为石油醚-乙酸乙酯（1+1）溶液。

2.3 ENVI-Carb柱的最优洗脱体积

实验比较了丙酮-乙酸乙酯（1+1）溶液的不同体积洗脱ENVI-Carb柱，发现4 mL洗脱最优，回收率最高。丙酮-乙酸乙酯（1+1）最佳洗脱液体积的峰面积如表3所示，因此柱净化过程选择4 mL丙酮-乙酸乙酯（1+1）洗脱液。

表3 ENVI-Carb柱丙酮-乙酸乙酯（1+1）最佳洗脱液体积选择结果表

2.4 Florisil柱的最优洗脱溶剂

实验比较了乙酸乙酯-石油醚（5+95）、乙酸乙酯-丙酮（1+1）、乙醚-正己烷（1+4）、正己烷-乙酸乙酯（9+1）和丙酮-正己烷（1+1）洗脱Florisil柱，发现乙醚-正己烷（1+4）洗脱最优，回收率最高。Florisil柱5种洗脱液方案的峰面积如表4所示，因此柱净化过程选择乙醚-正己烷（1+4）洗脱液洗脱。

表4 Florisil柱5种洗脱液选择结果表

2.5 Florisil柱的最优洗脱体积

本文比较了乙醚-正己烷（1+4）溶液的不同体积洗脱Florisil柱柱，发现5 mL洗脱最优，回收率最高。乙醚-正己烷（1+4）最佳洗脱液体积的峰面积如表5所示，因此柱净化过程选择5 mL乙醚-正己烷（1+4）洗脱液。

表5 Florisil柱乙醚-正己烷（1+4）最佳洗脱液体积选择结果表

2.6 样品检测

2.6.1 加标样品检测

加标样品（加标200 μg·kg-1）经ENVI-Carb柱和Florisil柱先后净化检测，效果良好，加标样品的TIC图如图1所示。

2.6.2 方法的回收率

在茶叶样品中分别添加 20 μg·kg-1、100 μg·kg-1、200 μg·kg-1的有机氯农药标准品，每个添加水平做3个平行样品，各组分的回收率见表3。由表6可知，有机氯农药添加20 μg·kg-1的回收率为64.00%～107.40%；100 μg·kg-1水 平 的 回 收 率 为 63.00% ～ 114.00%；200 μg·kg-1水平的回收率为60.00%～102.40%。由此可知，该方法经过几个阶段的净化处理后仍能获得比较良好的回收率，可以满足茶叶中残留有机氯农药组分含量的检测要求。

图1 加标样品的TIC图

表6 各组分的回收率表

3 结论

经过实验研究，本方法的前处理过程中，经ENVI-Carb柱净化可以去除大部分的色素后，再经Florisil柱净化可以去除大部分干扰物质，满足检测要求，利用GC-MS选择离子监测模式，分析灵敏度高。实验表明，此方法的回收率满足检测要求，适合于茶叶中5种有机氯农药残留量同时定性及定量分析。