◎ 贾琳斐，管 理，贾润芳，张 鑫，尹 静

（咸阳市食品药品检验检测中心，陕西 咸阳 712000）

罂粟壳为植物罂粟干燥后的成熟果壳，含有罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因等多种生物碱类物质[1]。罂粟壳的主要成分在临床具有一定的药用价值，但长期食用含有罂粟壳的食品，会产生一定的依赖性，严重时甚至会呼吸衰竭而死亡[2]。国家发布的《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》中含有罂粟壳。因此，建立一种前处理快速、准确性高的检测方法，对食品中生物碱的测定具有重要的意义。

目前，测定食品中生物碱的方法有分光光度法[3]、高效液相色谱法[4-5]、气相色谱法[6]、气相色谱-质谱法[7]及液相色谱-质谱法[8-10]。其中，气相色谱法和液相色谱法不能准确定性目标物，易造成假阳性结果，气相色谱-质谱法样品前处理复杂，检测成品较高，不适用于批量样品检测。

本实验采用高效液相色谱-串联质谱法通过优化色谱条件，建立罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因5种生物碱快速、简单、准确的检测方法。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

甲醇、乙腈：美国Thermo公司生产；超纯水由Millipore超纯水系统制备。罂粟碱、那可丁标准品：纯度99.9%，美国CATO公司生产；可待因标准品：纯度96.9%，中国食品药品检定研究院生产；蒂巴因、吗啡、吗啡-D3、可待因-D3标准品（液体）：纯度99%，规格1 mg·mL-1，Sigma公司生产。

1.2 仪器与设备

PE Qsight 210液相色谱-质谱联用仪（珀金埃尔默公司）；H1850离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）、VXRBS025自动涡旋混合器（德国IKA公司）。

1.3 方法

1.3.1 色谱条件

色谱柱：Phenomenex Kinetex C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，2.6 μm），柱温：40 ℃；进样体积：5 μL；流速：0.3 mL·min-1；流动相：A为0.1%甲酸乙腈，B为5 mmol·L-1乙酸铵；梯度洗脱程序：0～0.3 min，A、B比 例 为 10∶ 90；0.3～ 1.0 min，A、B由10∶ 90改 变 为 25∶ 75；1.0～ 3.5 min，A、B保持25∶75；3.5～4 min，A、B由25∶75改变为10∶90；4～7 min保持10∶90。

1.3.2 质谱条件

多反应监测扫描模式（MRM），ESI+，干燥器流速：110 μL·min-1；脱溶剂气温度：320 ℃；雾化器流速：180 μL·min-1；离子源喷雾电压：5 500 V；离子源温度：400 ℃。各化合物质谱条件参数见表1。

1.3.3 标准溶液配制

称取罂粟碱、可待因、那可丁标准品适量，用0.5%甲酸甲醇配制成浓度为1 mg·mL-1的标准储备液；用基质空白溶液配制罂粟碱、那可丁、蒂巴因的标准系列 工 作 液：0.05 ng·mL-1、0.1 ng·mL-1、0.2 ng·mL-1、0.5 ng·mL-1和 1.0 ng·mL-1；吗啡、可待因标准系列工作液：1.0 ng·mL-1、2.0 ng·mL-1、5.0 ng·mL-1、10 ng·mL-1和 25 ng·mL-1。内标浓度为 20 ng·mL-1。

1.3.4 样品前处理

称取2 g试样于50 mL离心管中，加入60 μL的5 μg·mL-1内标物，液体、半固体加入3 mL水，固体样品加入5 mL的0.1 mol·L-1盐酸溶液，涡旋振荡30 s，准确加入15 mL乙腈，涡旋振荡1 min，超声处理30 min，加入6 g无水硫酸镁和1.5 g无水醋酸钠的混合粉末，迅速振摇，涡旋振荡1 min，以4 000 r·min-1离心5 min，取上清液，0.22 μm滤膜过滤。进样测定吗啡、可待因；将滤液用乙腈稀释20倍，进样测定罂粟碱、那可丁、蒂巴因。

2 结果与分析

2.1 实验条件优化

2.1.1 色谱柱的选择

分别选用Phenomenex Kinetex HILIC柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm） 和 Phenomenex Kinetex C18柱（2.1 mm×100 mm，2.6 μm）2种不同的高效液相色谱柱对各组分进行分离。结果表明，HILIC柱分离效果不佳，且峰型较差；而C18柱分离度较好，且峰型较HILIC柱更佳，故选择Phenomenex Kinetex C18柱作为高效液相色谱柱。

2.1.2 流动相的选择

分别配制0.1%甲酸水-甲醇，0.1%甲酸乙腈-5 mmol·L-1乙酸铵作为流动相。结果显示，选用0.1%甲酸水-甲醇作为流动相，5种组分峰型较宽，且分离度较差，罂粟碱与那可丁并未分开；选用0.1%甲酸乙腈-5 mmol·L-1乙酸铵作为流动相，峰型较前两者有明显改善，分离效果佳，线性较好，且响应最高，故选择0.1%甲酸乙腈-5 mmol·L-1乙酸铵作为流动相。

2.2 方法检出限及定量限

取5种标准物质的系列工作液进样，以罂粟碱、那可丁、蒂巴因的色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制工作曲线，外标法定量；以吗啡、可待因的色谱峰面积与相应内标物峰的比值为纵坐标，浓度为横坐标绘制工作曲线，内标法定量。S/N=3时对应目标物的含量为方法检出限；S/N=10时对应目标物的含量为方法定量限。结果得出，罂粟碱、那可丁、蒂巴因的方法检出限为2.5 μg·kg-1，方法定量限为 7.5 μg·kg-1。吗啡、可待因方法检出限为 12 μg·kg-1，方法定量限为 36 μg·kg-1。

2.3 精密度及回收率

准确称取16份阴性试样各2 g于50 mL离心管中，一组作为空白对照，其余15份平均分为3组，进行3梯度加标试验。基质空白标准曲线进行定量测定，计算方法回收率和精密度，结果见表2。由表中数据分析得知，该方法精密度、回收率均满足痕量实验分析要求。

表2 添加3种不同浓度的回收率及精密度表

3 结论

本研究使用三重四极杆电喷雾离子源（ESI），采用多反应监测模式（MRM），可以准确测定食品中罂粟碱、那可丁、蒂巴因、吗啡和可待因5种生物碱，其中，罂粟碱、那可丁、蒂巴因的检出限为2.5 μg·kg-1，定量限为 7.5 μg·kg-1；吗啡、可待因的检出限为 12 μg·kg-1，定量限为 36 μg·kg-1。平均回收率为84.2%～96.0%，精密度为3.2%～6.8%。该方法准确性好，前处理易操作，可用于生物碱的批量检测。