胡孔颖，金宇焘，叶建宇，宰文静，王洋，李雨檬，陈捷亮

复旦大学上海医学院，基础医学院病原生物学系，医学分子病毒学教育部/卫健委重点实验室，上海 200032

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)慢性感染所致慢性乙型肝炎及其相关肝硬化、肝癌等肝脏疾病严重威胁人类的健康[1]。尽管预防性乙型肝炎疫苗的使用已大大降低HBV在人群中的感染率，但目前仍缺乏能有效治愈慢性乙型肝炎的药物和治疗手段。HBV基因组以松弛环状DNA(relaxed circular DNA，rcDNA)形式包裹在病毒核衣壳内，在病毒感染宿主细胞后，其会被修复成环进而以共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA，cccDNA)的形式存在于细胞核中。HBV cccDNA兼具病毒转录复制模板和基因储存库的功能，可转录出各种HBV RNA，进而翻译出包括乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)在内的各类病毒蛋白[2]。HBV cccDNA在肝内的持续存在、难以清除是乙型肝炎慢性化和难治愈的关键，也是HBV研究领域的重点[3]。

在HBV cccDNA研究中，HBV cccDNA的准确检测至关重要，而从细胞中抽提获取可供DNA印迹(Southern blot)和定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction, qPCR)检测的HBV cccDNA是前提。传统Hirt法是由Hirt等[4]报道的用来抽提病毒感染细胞后存在的非整合病毒DNA的方法。该法利用染色体DNA很长且与大量蛋白质相结合的特性，以高盐溶液使染色体DNA沉淀，而游离于染色体外的微小DNA大多不被沉淀而留在上清中，因此被分离[4]。此法结合酚/氯抽提，很早便应用于HBV cccDNA的抽提[5]，但存在操作复杂和耗时长等弊端。为简化操作和缩短实验时间，早前有报道通过改良Hirt法来快速抽提染色体外DNA，该法裂解细胞和沉淀染色……