陈观平，汪一帆，应栩华

(浙江省立同德医院中西医结合肿瘤研究所，浙江 杭州 310012)

我国每年乳腺癌新发病24.9万，居女性恶性肿瘤第1位，病死率居第5位，且其发病率呈逐年上升趋势，严重危害了广大妇女的健康。研究显示，25%-30%的乳腺癌患者存在HER2(人表皮生长因子受体-2)蛋白的过量表达[1]。HER2表达量越高，肿瘤的恶性程度也越高，患者预后越差[2]。

HER2靶向治疗的推出大大提高了HER2+乳腺癌患者的长期存活率，并为各个阶段都提供了多种治疗选择。其中被临床应用并证明有效的抗体是人表皮生长因子受体2抗体(Anti-her2)[3]。单抗Anti-her2可与HER2受体胞外区特异性结合，从而抑制肿瘤细胞生长，并使过量表达HER2受体的肿瘤细胞对细胞毒性因子更加敏感[4]。HER2单抗的出现，很大程度上改善了HER2阳性乳腺癌患者的治疗及预后。

重组单抗具有高特异性、高活性和低毒性等特点，从而使其在医药领域备受关注，并逐渐成为国内外药物研发企业的研究热点。目前，重组抗体的生产主要依赖哺乳动物表达系统。该表达系统的优势在于可进行包括糖基化修饰在内的各种翻译后修饰，从而使获得的重组蛋白具有与人体来源相似的糖蛋白结构[5]。本实验中，我们利用构建的HER2人源化单克隆抗体重链及轻链表达载体转化中国仓鼠卵巢细胞(CHO)，筛选获得稳定表达重组HER2人源化单克隆抗体的细胞株，并小规模发酵生产重组抗体，为后续深入研究HER2过表达与乳腺癌的关系及其基因治疗奠定基础。

1 材料与方法

1.1 质粒及细胞Anti-her2重链、轻链模板：pMC-her2 HC、pMC-her2 LC由西湖大学金炜元副研究员馈赠；……