卞丽霞 刘佩 黄雯 俞军 蒲加泽

胃癌(gastric cancer)是全球范围内癌症导致死亡的第三大原因[1]。据中国国家癌症中心统计数据，胃癌已成为中国第二大常见癌症，2015年约有498 000例患者死亡[2]，而且大多数患者被诊断时已是晚期，导致胃癌患者的5年生存率<25%[3]。许多植物中的化学物质会对癌症产生一定的抑制作用，白藜芦醇(Resveratrol，RES)就是其中之一。白藜芦醇是一种非黄酮类多酚化合物，是许多植物受到外界刺激后产生的一种抗毒素，白藜芦醇除对衰老[4,5]、糖尿病[6,7]、心血管疾病[7]等有作用外，还对肺癌[8]、前列腺癌[9]、肝癌[10]、胃癌[11]等癌症有一定的抗瘤活性。MicroRNA(miRNA，miR)是长度为18～25个核苷酸的非编码短RNA分子，在人类癌症的发生和发展中起着重要的作用，而且有可能被用作癌症的潜在治疗靶点[12]。据研究报道，有多种miRNA参与了癌症的发生和发展，且部分miRNA也可以作为癌症诊断的分子标志物[13,14]。miR-491在多种癌症中能够调节癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭和耐药性[15,16]，且miR-491对胃癌细胞也有一定的抑制作用[17,18]。

1 材料与方法

1.1 细胞 人胃癌细胞株SGC-7901和人胃上皮细胞株GES-1购于中国科学院(上海)细胞库。

1.2 试剂与主要仪器 Lipofectamine 2000脂质体转染试剂盒、Trizol试剂盒均购于赛默飞；TaqMan miRNA逆转录试剂盒购于连桥生物科技有限公司；SYBR-Green PCR Master Mix试剂盒购于瑞诺德生物科技有限公司；DMEM培养基购于科敏生物科技有限公司。Thermo酶标仪购于益奥柏科贸有限公司；Smartzoom 5显微镜购于普瑞赛斯仪器有限公司。

1.3 细胞培养 胃癌细胞株SGC-7901和胃上皮细胞株GES-1在37℃、5% CO2的条件下置于含有10%FCS的DMEM培养基中培养，用于后续实验。

1.4 细胞转染 SGC-7901细胞在DMEM培养基中培养至细胞融合80%左右时进行转染。SGC-7901细胞以5×104个/孔的密度接种于96孔板，按照脂质体转染试剂盒说明书将上海吉玛公司设计并合成的脂质体转染至SGC-7901细胞中，转染脂质体48 h后检测转染效率并进行后续实验。

1.5 细胞增殖实验 SGC-7901细胞以5×104个/孔的密度接种于96孔板，对细胞进行相应处理后使用CCK-8检测试剂盒检测各组细胞的增殖活力，使用酶标仪测定各孔在450 nm处的吸光光度值，每组设置3个复孔并设置空白对照。

1.6 细胞迁移实验 将各组细胞以2×104个/室的密度接种于包覆有Matrigel基质胶的Transwell小室上室，在下室中加入含有10%FCS的DMEM培养基作为引诱剂。24 h后擦拭掉上室未发生迁移的细胞，使用4%多聚甲醛固定下室中的细胞并使用0.1%的结晶紫染色。……