吴倩 ，穆婷婷 ，汪宁

1 安徽中医药大学 安徽合肥 230012

2 中药复方安徽省重点实验室，安徽中医药大学 安徽合肥 230012

3 安徽省中医药科学院中药药效与安全评价研究所，安徽中医药大学 安徽合肥 230012

海马是大脑边缘系统的重要组成部分，参与学习、记忆、情绪反应等多种高级精神活动[1]。同时，海马也是脑组织中对低氧最敏感的区域，因此，原代培养海马神经元细胞适用于缺血性脑损伤模型的制备及研究[2]，但海马神经元的培养过程较为复杂，细胞及其娇嫩，培养过程可变因素较多，因此，进一步优化其培养过程，对于获得纯度较高生长稳定的海马神经元极为重要。本文通过对国内外相关文献的参考，并在实际操作中不断摸索和改良，对海马神经元的培养进行了优化，以期为脑缺血的体外研究提供更好的模型。

材料和方法

1 材料

1.1 实验动物 健康新生24h的SD大鼠，雌雄不限，由安徽医科大学实验动物中心提供。

1.2 实验试剂 L-多聚赖氨酸（7~15万单位），Sigma公司；胰蛋白酶消化液，碧云天生物技术研究所；胎牛血清（FBS）、Neurobasal Medium培养基、B27（神经营养因子），L-Glutaminne（谷氨酰胺），Gibco公司；PBS缓冲盐；Map-2、Cy3荧光二抗等。

1.3 实验器具与仪器 手术器具：眼科剪（3把）、弯镊（3把）、直镊（1把）、纱布若干、培养皿（2个）、漏斗（2个）、玻璃吸管（2根）、青霉素瓶若干、15mL离心管若干，以上物品需提前高压后使用；冰盒（-20℃）。

仪器：恒温 CO2细胞培养箱，超净工作台，倒置显微镜，荧光倒置显微镜。

2 实验方法

2.1 培养皿的处理 实验选用6孔培养板进行细胞培养，用终浓度为0.1%的多聚赖氨酸，于培养箱进行包被铺板，约30min~1h，包被结束后回收多聚赖氨酸，用无菌PBS冲洗6孔板2遍，待用。……