贲雨龙，李世芬，胡 奇，王言之，王玉邦

（1.南京医科大学儿科学院，江苏南京 211166；2.南京医科大学公共卫生学院，江苏南京 211166；3.江苏省医药农药兽药安全性评价与研究中心，江苏 南京 211166；4.南京医科大学第一临床医学院，江苏 南京 211166）

0 引言

人参皂苷属于固醇类化合物，作为一种活性成分主要存在于人参属药材中。因为人参皂苷在多条代谢途径中都能发挥一定的作用，因此具有复杂的效能。有研究发现，人参皂苷具有抑制癌细胞向其他器官转移[1-2]、增强免疫力等作用[3-4]。同时，人参皂苷在兴奋中枢神经、抗疲劳、改善记忆与学习能力、抗休克[5-8]等方面具有重要意义。鉴于人参冻干粉胶囊中主要有效成分为人参皂苷，课题组设计试验研究人参冻干粉胶囊对小鼠缓解疲劳的功能，旨在为人参冻干粉胶囊的进一步开发提供科学依据。

1 材料和方法

1.1 样品

人参冻干粉胶囊，规格为0.4 g/粒×100粒/瓶，批号：20151128，由南京中科药业有限公司提供的胶囊内容物为试验的受试样品，样品颜色为淡灰色，呈粉末状，样品密封置干燥处保存。样品标示保质期为24个月，该受试样品的人体推荐摄入量为2.4 g/人·日。

1.2 试验动物

选用健康雄性小鼠为试验对象，数目为160只，规格为SPF级，由上海某公司提供。各平行试验组初始体重范围为19.0~21.9 g。按体重随机分为Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ4组，其中每大组中的小鼠均为40只，各分为每小组10只的4个剂量组，分别进行负重游泳试验、血浆尿素测定、肝糖原测定和血乳酸测定。

试验动物在中心屏障环境中饲养，维持饲养环境温度为20~26℃，相对湿度为40%~70%。

1.3 剂量选择与受试物给予方式

根据受试样品每人每日推荐摄入量2.4 g（按60 kg体重计），按照剂量大小设计低、中、高3个剂量组，即0.20，0.40，1.20 g/kg·bw/d，分别等同于人体推荐摄入量的5倍，10倍，30倍，另设0 g/kg·bw/d对照组，用无菌水代替受试物。受试样品用无菌水配制，低、中、高剂量配制质量浓度分别为20，40，120 mg/mL，按0.1 mL/10 g·bw灌胃。以每日1次的频率，经口途径给予小鼠相应浓度的受试样品，不间断灌胃1个月后测各项指标。

1.4 仪器

TG16-WS型台式高速离心机、JA2003型电子天平、科华ST960型酶标仪、HWS-26型水浴锅等。

1.5 试验方法

1.5.1 负重游泳试验

末次给小鼠受试物后，等待30 min，在鼠尾根部负荷5%体重的铅丝。将小鼠放置在水深约35 cm，水温25±1℃的游泳箱中使其做游泳运动。用计时器计量试验小鼠从游泳开始到完全死亡的时长，即小鼠负重游泳时间。

剂量组负重游泳时间明显长于0 g/kg·bw/d组，且差异有显著性，可判定该试验结果阳性。

1.5.2 血浆尿素测定

末次给小鼠有关受试物后，间隔30 min，使小鼠处于不负重状态，在水温30℃的环境下做90 min的游泳运动。小鼠休息60 min后立即对其执行眼眶采血操作。对收集的小鼠血样进行离心处理，吸取20μL血浆，用二乙酰-肟法测定血浆尿素值。

剂量组血浆尿素低于0 g/kg·bw/d组，且差异有显著性，可判定该试验结果阳性。

1.5.3 肝糖原测定

末次给小鼠受试物后，留以0.5 h等待时间，然后立刻执行处死操作并摘取其肝脏。用实验室自制的生理盐水漂洗摘取物，用滤纸吸干残余水渍，将0.225 mL碱溶液加入精确称取的75 mg肝脏中，将混合物煮沸20 min，制成1%肝匀浆液。将2 mL蒽酮试剂加入0.1 mL所制溶液，进行煮沸处理5 min。待其冷却后进行比色测定，波长设为620 nm，基于称得的肝脏质量对肝糖原含量进行计算并记录。

剂量组肝糖原含量明显高于0 g/kg·bw/d组，且差异有显著性，可判定该试验结果阳性。

1.5.4 血乳酸测定

末次给小鼠受试物后，留以0.5 h等待时间，于眼眶采血。然后令未负重的小鼠在水温为30℃的环境中做10 min的游泳运动，结束后立即眼眶采血，休息20 min后再执行眼眶采血操作，对小鼠血乳酸含量进行测定和记录。

剂量组血乳酸曲线下面积小于0 g/kg·bw/d组，且差异有显著性，可判定该试验结果阳性。

1.6 数据处理

用SPSS 22.0软件对各试验各剂量组的初始数据进行方差齐性检验，用两两比较方法和秩和检验分别对满足方差齐要求的数据资料和非正态分布的数据资料进行统计处理。

1.7 结果判定

若负重游泳试验结果为阳性，同时血乳酸、血浆尿素、肝糖原3项生化指标中任意2项指标为阳性，即可判定该受试样品具有缓解体力疲劳作用。

2 结果与分析

2.1 人参冻干粉胶囊对小鼠体重的影响

人参冻干粉胶囊对小鼠体重的影响见表1。

由表1可见，小鼠的初始体重0.20，0.40，1.20 g/kg·bw/d组与0 g/kg·bw/d组比较，差异无统计学意义（p>0.05）。即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。

表1 人参冻干粉胶囊对小鼠体重的影响

表1 人参冻干粉胶囊对小鼠体重的影响

剂量/g·（kg·bw/d）-1 动物数/只 Ⅰ组初始体重/g p值 Ⅰ组终末体重/g 增长值/g p值0 0.20 0.40 1.20 10 10 10 10 20.44±0.93 20.48±0.69 20.43±0.79 20.44±0.89 0.999 1.000 1.000 27.34±1.31 26.87±1.05 26.98±1.17 27.65±1.11 6.90±1.40 6.39±0.96 6.55±1.24 7.21±1.56 0.716 0.880 0.912

由表1可见，0.20，0.40，1.20 g/kg·bw/d组与0 g/kg·bw/d组比较，差异无统计学意义（p>0.05）。

2.2 人参冻干粉胶囊对小鼠负重游泳时间的影响

人参冻干粉胶囊对小鼠负重游泳时间的影响见表2。

由表2可见，0.40 g/kg·bw/d组小鼠负重游泳时间长于0 g/kg·bw/d组，差异有统计学意义（p<0.05）。

表2 人参冻干粉胶囊对小鼠负重游泳时间的影响

2.3 人参冻干粉胶囊对小鼠游泳后血浆尿素水平的影响

人参冻干粉胶囊对小鼠游泳后血浆尿素的影响见表3。

表3 人参冻干粉胶囊对小鼠游泳后血浆尿素的影响

表3 人参冻干粉胶囊对小鼠游泳后血浆尿素的影响

剂量/g·（kg·bw/d）-1动物数/只 血浆尿素/mmol·L-1 p值0 0.20 0.40 1.20 10 10 10 10 6.19±0.83 5.96±0.52 5.44±0.24 5.71±0.47 0.667 0.013 0.148

由表3可见，0.40 g/kg·bw/d组血浆尿素水平低于0 g/kg·bw/d组，差异有统计学意义（p<0.05）。其余2个剂量组与对照组比较，血浆尿素水平都存在一定水平的降低，但差异无统计学意义。

2.4 人参冻干粉胶囊对小鼠肝糖原储备量的影响

人参冻干粉胶囊对小鼠肝糖原储备量的影响见表4。

表4 人参冻干粉胶囊对小鼠肝糖原储备量的影响

表4 人参冻干粉胶囊对小鼠肝糖原储备量的影响

剂量/g·（kg·bw/d）-1动物数/只 肝糖原/mg·g-1 p值0 0.20 0.40 1.20 10 10 10 10 22.6±5.6 27.6±6.6 25.7±2.1 27.5±4.2 0.089 0.218 0.063

由表4可见，0.20，0.40，1.20 g/kg·bw/d组肝糖原储备量与0 g/kg·bw/d组比较，差异无统计学意义（p>0.05），人参冻干粉胶囊对小鼠肝糖原储备量无显著影响。

2.5 人参冻干粉胶囊对小鼠游泳前后血乳酸值及其曲线下面积的影响

人参冻干粉胶囊对小鼠游泳后血乳酸（mmol/L）曲线下面积的影响见表5。

表5 人参冻干粉胶囊对小鼠游泳后血乳酸（mmol/L）曲线下面积的影响

由表5可见，0.40 g/kg·bw/d组小鼠游泳后血乳酸曲线下面积值低于0 g/kg·bw/d组，差异有统计学意义（p<0.05）。与对照组相比，0.40 g/kg·bw/d，1.20 g/kg·bw/d剂量组小鼠血乳酸曲线下面积值均有降低，但差异无统计学意义。

3 结论

从试验结果分析，与0 g/kg·bw/d组相比，0.40 g/kg·bw/d组负重游泳的时间更长，血浆尿素含量更低；游泳后血乳酸曲线下面积值也更小，且差异均有统计学意义（p<0.05）。根据《保健食品检验与评价技术规范》之缓解体力疲劳功能试验的结果判定，在试验条件下人参冻干粉胶囊具有缓解体力疲劳的作用。

随着社会压力的日益增大，疲劳逐渐成为一种普遍而广泛的社会现象，并对人们的身心健康产生重大危害。根据疲劳物质累积理论，劳动者在劳动过程中会在体内逐渐积累起某种疲劳物质（即乳酸等化学物质），这种疲劳物质会在肌肉和血液中逐渐堆积，最终使人体力衰竭。因此，血乳酸含量是衡量疲劳程度的重要标准。试验中，0.40 g/kg·bw/d组小鼠游泳后血乳酸曲线下面积值低于0 g/kg·bw/d组，与宋昕恬等人[9]的研究结果互相印证，证实人参皂苷能显著减少乳酸堆积。同时，由于能使机体红细胞的数量增加，血红蛋白含量提高，因此人参皂苷在提高氧的供给和增强氧代谢方面具有重要作用，最终减少乳酸的产生，缓解疲劳[10]。再者，人参皂苷能大大刺激机体运动时LDH的活性[11-12]，使氢离子的释放受到抑制，同时加强机体对乳酸的清除能力，让机体的酸化程度得到一定程度的降低，并且有利于恢复肌肉正常的收缩性能，这与姚根兰等人[13]研究的人参抗疲劳作用试验结果相近。人参冻干粉胶囊的缓解疲劳作用或可广泛应用于提高人体运动能力、减轻疲劳对人体发育的阻碍作用等方面。随着人参皂苷研究成果的积累，其功效原理必将发挥更加积极的作用。