满 云

（蚌埠学院 食品与生物工程学院，安徽 蚌埠233030）

1 引言

柠檬酸是生物体内主要的代谢产物之一。1913年首次报道黑曲霉能生成柠檬酸，柠檬酸生产的方法由提取法变为发酵法，柠檬酸为三羧酸循环过程中的中间产物［1］（P229-230）。 柠檬酸发酵液中的其他有机酸主要包括谷氨酸、葡萄糖酸、草酸、苹果酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、α-酮戊二酸、丁二酸、富马酸、乌头酸和衣康酸等［2］（P65）。 有机酸含量过多，会影响柠檬酸的纯度，降低柠檬酸转化率。

目前对有机酸含量的检测方法很多［3］［4］（P121）［5-6］，高效液相色谱技术应用于有机酸的含量检测也有很多报道［7-14］，但已有的报道中测定的有机酸品种有限，同时测定多种有机酸的报道不多。 本实验利用高压液相色谱同时测定柠檬酸发酵液中的有机酸，通过选择适合的流动相pH 值、流速、柱温、检测波长等，拟建立准确可靠、简洁快速有效的检测方法，同时分析柠檬酸发酵液中的12 种杂有机酸，以期为柠檬酸发酵工艺的优化提供了理论依据。

2 材料与方法

2.1 供试材料和试剂

柠檬酸发酵液， 中粮生化柠檬酸生产线提供；乙腈（色谱纯），美国Tedia 公司生产；谷氨酸、葡萄糖酸、草酸、苹果酸、丙酮酸、乳酸、乙酸、琥珀酸（丁二酸）、富马酸（延胡索酸）、乌头酸、衣康酸、柠檬酸标准品，百灵威科技有限公司生产。

2.2 仪器与设备

1200 安捷伦色谱仪；Diamonsil C18 （4.6 mm×250 mm）；检测器：PDA 检测器。

2.3 试验方法

2.3.1 标准酸混合液的配制

表1 混合标准液的配制 g/100 mL

因杂酸含量不定，为定量准确，配制多级混合标准液。 标准液采用蒸馏水配制，用0.22 μm 的滤膜过滤。……