黄明耀，梁文立，吴婉婷，刘 足，谢淑媚，邓颖颖，傅俊方，姜长宏，龙 军，江凌晓

布鲁氏菌病(Brucellosis)简称“布病”，是一种具有传染性的人兽共患病，由布鲁氏菌引起。临床鉴定布鲁氏菌的方法主要有需氧血培养和血清学检测，其中培养是金标准。当临床发现不明原因发热的患者时，通常抽取10 mL静脉血到血培养瓶进行培养，血培养报阳后转至血平板继续培养16～24 h，通过质谱仪或微生物鉴定系统进行鉴定，至少需要18～48 h，而且在平板培养观察以及调制菌悬液的过程中易产生气溶胶，存在实验室感染风险。本研究拟建立一种基于CRISPR/Cas13a的布鲁氏菌鉴定方法，该方法可以对需氧血培养阳性培养物中存在的布鲁氏菌进行快速准确鉴定。

1 材料与方法

1.1材 料

1.1.1实验菌株 布鲁氏菌64株(由广东省CDC提取DNA后提供，菌株均分离自临床患者全血培养物)，包括羊种布鲁氏菌27株、猪种布鲁氏菌7株、牛种布鲁氏菌1株和未知亚种布鲁氏菌29株。

非布鲁氏菌56株：包括革兰阴性杆菌28株(沙门氏菌2株、大肠埃希菌5株、阴沟肠杆菌1株、产气肠杆菌1株、肺炎克雷伯氏菌3株、产酸克雷伯菌1株、鲍曼不动杆菌5株、铜绿假单胞菌3株、粘质沙雷氏菌2株、琼氏不动杆菌1株、嗜麦芽窄食单胞菌1株、嗜水/豚鼠气单胞菌1株、脑膜败血伊丽莎白金菌1株、皮氏罗尔斯顿菌1株)、革兰阳性球菌24株(无乳链球菌2株、化脓链球菌1株、星座链球菌1株、咽峡链球菌1株、表皮葡萄球菌2株、金黄色葡萄球菌3株、缓慢葡萄球菌1株、溶血葡萄球菌2株、头部葡萄球……