鲁 瑶，赵丽丽，李马超，刘海灿，赵秀芹，刘志广，万康林，楼永良

利福平耐药结核病(Rifampicin-resistant tuberculosis，RR-TB)是指患者感染的MTB对利福平耐药的结核病。据世界卫生组织(World Health Organization，WHO)统计，2019年全球RR-TB新发病例大约46.5万例，其中78%为耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis，MDR-TB)，死亡人数约18.2万例，我国为MDR-TB高负担国家之一，占14%，居世界第二，而其治疗成功率仅为57%[1]。MDR-TB是指结核病患者感染的MTB至少同时对异烟肼和利福平耐药的结核病。研究表明RR-TB通常同时对异烟肼耐药[2-3]，并且结核分枝杆菌对利福平是否耐药也决定了临床上不同的治疗方案[4],所以对结核分枝杆菌利福平耐药性的快速检测意义重大。rpoB是利福平作用的靶基因，其作用机制是通过与RNA聚合酶β亚基结合，抑制细菌转录导致细菌死亡。在我国的结核病患者中，90%～95%的耐利福平结核分枝杆菌在rpoB中的利福平耐药决定区(即rpoB基因507-533位氨基酸密码子)存在突变[5]。已有不少研究表明，利福平耐药决定区中最常见的突变位点位于531、526、516位氨基酸密码子[6]。

用于检测基因突变的常规诊断技术大多以实时荧光定量PCR或DNA测序技术作为基础，这些方法不仅费时而且所需仪器设备要求高[7]。重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification，RPA)技术是一种恒温扩增技术。它用大肠杆菌重组酶和单链结合蛋白替代了PCR中加热变性这一过程，用一种单链置换聚合酶替换了TaqDNA聚合酶，使扩增反应在37 ℃左右的恒温条件下就能进行[8]。本研究将该技术与侧流层析试纸条技术相结合，即在基于RPA反应设计的下游引物5′端标记羧基荧光素(FAM)，上游引物即探针的5′端标记生物素(Biotin)或地高辛(Dig)。……