张路捷，高雁怩，夏婷婷，白娟，姜平

(南京农业大学/农业农村部动物细菌学重点实验室，江苏 南京 210095)

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)可引起猪严重疫病，呈现高发病率和死亡率，高热和全身出血等特征，对全球养猪业造成了巨大经济损失，至今尚无有效的商品化疫苗和治疗方法，早期诊断是控制该病的重要方法之一[1]。

ASFV是一个复杂的二十面体双链DNA病毒，基因组长度约为170～190 kb，共编码50多种结构蛋白，其中p72、p54和p30蛋白具有较好的抗原性和免疫原性，可用于ASFV血清学诊断[2-6]。ASFV p30蛋白由CP204L基因编码，属于病毒的早期蛋白，主要参与病毒入侵过程[7]，能够诱导猪体产生较强的免疫反应[8]。本研究根据ASFV Pig/HLJ/2018毒株序列设计引物扩增CP204L(p30)基因，通过原核表达系统获得ASFV重组p30蛋白，制备出2株针对p30蛋白的单克隆抗体，为ASFV诊断和生物学特性研究奠定了基础。

1 材料与方法

1.1 主要材料

ASFV阳性病料、小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)和pET-32a (+)载体、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪塞内卡病毒A(SVA)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)由本实验室收集保存。SPF级雌性BALB/c小鼠(6～12周龄)购自扬州大学实验动物中心。ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞玻片和灭活病毒液由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所制备提供。

DH5α及BL21(DE3)，购自全式金生物技术有限公司；2 × Phanta Max Master Mix和180 kDa Prestained Protein Marker，购自诺唯赞生物科技股份有限公司；限制性核酸内切酶EcoRⅠ、XhoⅠ和T4 DNA连接酶，购自Thermo Fisher Scientific公司；RPMI-1640培养基、胎牛血清，购自美国Gibco公司；羊抗鼠IgG(H+L)-HRP，购自碧云天生物技术有限公司；异硫氰酸荧光素(FITC)-羊抗鼠IgG、小鼠单克隆抗体亚型鉴定试剂盒，购自Proteintech生物科技有限公司；……