猪源盖塔病毒Cap蛋白与E2蛋白多克隆抗体的制备及其免疫特性分析
2021-05-28苏靖茵燕诗雨张萌粟硕
苏靖茵,燕诗雨,张萌,粟硕
(南京农业大学免疫研究所,江苏 南京 210095)
盖塔病毒(Getah virus, GETV)是典型的虫媒病毒,最早于1955年从马来西亚的白雪库蚊中分离并命名,随后陆续又从猪群、马群中分离出该病毒。近年来,世界各国出现母猪感染零星病例,而在2017年中国湖南猪场出现母猪和仔猪盖塔病疫情[1]。临床上,GETV对猪和马的侵害性较大,他们的症状主要表现为发热、浮肿等[2]。GETV在国内外均有流行,且我国陆续报道除马、猪以外的多种动物(牛和狐狸等)感染病例[3]。
GETV是单股正链RNA病毒,属于披膜病毒科甲病毒属的成员。GETV全基因组长11~12 kb,包含2个开放阅读框,分别编码非结构蛋白和结构蛋白。GETV的5个结构蛋白分别是C、E3、E2、6K和E1。在甲病毒中,Cap蛋白是一种多功能蛋白,包含N端RNA结合域和C端结构域[4]。Cap蛋白能与病毒基因组特性结合,这会影响病毒核衣壳形成和RNA合成[5]。此外,Cap蛋白不仅能促进核衣壳组装过程中Cap蛋白二聚作用,还能促进在出芽过程中与糖蛋白细胞质结构域的相互作用[6]。E2是糖蛋白,分子量约为50 kDa;pE2是E2的前体,能裂解成E2和E3[5]。在甲病毒粒子感染过程中,E2作为介导病毒进入宿主细胞的主要蛋白。
GETV的Cap蛋白与E2蛋白可能在病毒感染和病毒复制中起重要重要作用。但现今对于GETV的病毒蛋白与及致病机制等研究仍较少[7],而GETV的抗体能促进其相关研究。因此,本文通过了原核表达Cap和E2蛋白并制备了GETV的多抗,以用于GETV的基础研究。
1 材料与方法
1.1 材料
Vero、BHK细胞和pET-32a(+)载体均为本实验室保存。DH5α与BL21(DE3)感受态均购自康为公司。GETV由本实验室分离纯化后保存。……
