张毅，陈斌，梁璐琪，邵靓，周明忠，裴超信，陈弟诗，丁梦蝶，陈冬

(四川省动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041)

戊型肝炎是一种人畜共患传染病，由戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)引起，人的发病以青壮年为主，病程4～6 周，死亡率0.5%～3%，临床可表现从亚临床感染到重度肝炎，对妊娠、慢性肝病、免疫缺陷、器官移植等特殊人群威胁重大[1]。对人易感的HEV仅有1个血清型，4个基因型[2]，其中基因1型、2型仅感染人，基因3型、4型则可感染人和猪、鼠等多种动物。猪是HEV主要的储存宿主和传染源，其感染HEV时不产生明显临床症状和病变，猪源HEV可能通过食用未煮熟的猪肉产品[3]、长期的职业暴露(屠宰场工人[4]、兽医[5])等途径传播给人，对于公共卫生安全是一种严重的潜在威胁。

HEV基因组全长约7.2 kb，目前已发现4个开放阅读框(open reading frame, ORF)。ORF1主要编码复制相关的非结构蛋白；ORF2和ORF3由病毒亚基因组的可选阅读框产生，分别编码衣壳蛋白和小免疫磷蛋白，ORF2编码的衣壳蛋白含有重要免疫表位，后者与细胞骨架相关；ORF4只在基因1型中发现，编码区位于ORF1内部，编码蛋白通过形成蛋白复合物参与病毒的复制[6]。

为了解四川猪源HEV流行特征，本研究对四川部分地区的屠宰场生猪进行HEV监测，并对HEV编码衣壳蛋白的ORF2部分序列进行同源性和系统进化分析，为HEV的防控策略提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 样品来源

2019年在四川省13个地区屠宰场采集的猪组织样品(淋巴结、肝)358份，-20 ℃保存。

1.2 主要试剂

MagMAXTMPathogen RNA/DNA Kit总核酸提取试剂盒，购自Thermo Fisher Scientific 公司; One Step PrimeScriptTMRT-PCR Kit (Perfect Real Time)、PrimeScriptTMOne Step RT-PCR Kit Ver.2、Tks GflexTMDNA Polymerase、DL2000 DNA Marker等，购自宝日医生物技术有限公司。

1.3 引物、探针的设计与合成

荧光定量PCR(qRT-PCR)检测：参照文献[7]建立的方法进行。……