李 巧，王亚琴，贺 红*，张 泳，张宇瑶，黎广卫

1.广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006

2.广州中医药大学 中药资源科学与工程研究中心，广东 广州 510006

广藿香Pogostemon cablin(Blanco) Benth.为唇形科刺蕊草属植物，以干燥地上部分入药，其味辛，性微温，具有芳香化浊，和中止呕，发表解暑等功能，为广东道地药材、“十大广药”之一。广藿香在种植过程中，易感染青枯病。青枯病是一种细菌性土传病害，病原菌在植物维管束内定殖和繁殖，破坏寄主植物的输导系统，使植株无法正常吸收水分和养分导致枯萎死亡[1]。青枯病严重影响广藿香的产量和质量，危及广藿香的生存和发展。发现和研究病原菌致病相关基因，有助于了解病原菌致病机理、开发抗菌的靶标药物及发展新的防病策略。

转座子（transposon，Tn）是DNA插入因子的一种，是一类可以在基因组中移动的DNA片段[2]。目前细菌转座子Tn5的转座机制已阐明，利用Tn5转座突变技术，将转座子插入到细菌基因组中，使得插入位点处基因发生突变并导致其相关功能活性丧失，从而筛选出功能发生突变的菌株[3]。如果转座子插入位点基因是病原菌致病相关基因，就可能导致病原菌致病力丧失或减弱，由此可发现致病相关基因[4-5]。本课题组前期从感染了青枯病的广藿香植株中分离得到了青枯菌菌株Ralstonia solanacearumPRS-84[6]，并利用Tn5转座子插入突变及致病性筛选获得了菌株PRS-84的低致病力突变株[7]。本研究以低致病力突变株PRS-84-4-7为实验材料，对其进行致病性验证，再以插入的Tn5转座子序列为基础，利用反向PCR扩增获得转座子插入位点的侧翼序列，并对插入位点基因进行克隆及生物信息学分析，为了解广藿香青枯病菌的致病机制、发展新的防病策略奠定基础。……