陈磊 吴小燕

(海南医学院第二附属医院心内科，海南 海口 570100)

慢性心力衰竭是多种心脏疾病终末状态，当心肌细胞发生衰竭后会导致多种生物过程发生改变，其中较为重要的表现之一为肌浆网Ca2+调控障碍〔1〕。已有研究证实在心力衰竭患者和心力衰竭动物模型的心肌细胞中心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA)2a活性显著降低，且其表达水平显著低于在正常心肌细胞中的表达，目前临床上认为SERCA2a活性降低和表达下降和肌浆网Ca2+调控障碍是导致心脏收缩、舒张功能异常的原因之一〔2,3〕。本研究中通过建立慢性心力衰竭大鼠模型，构建SERCA2a基因慢病毒载体，研究上调SERCA2a基因对慢性心力衰竭大鼠的作用及机制。

1 材料与方法

1.1材料 研究动物：选取SPF级SD健康大鼠40只，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，鼠龄(3.9±0.6)个月，体重(225.8±11.5)g。所有大鼠均养殖在干净笼子里，室温在(22.1±1.8)℃，相对湿度35%～40%，每天光照12 h，喂饮纯净水，饲养时间1 w。本研究所做实验均获得医院伦理委员会批准。

主要试剂：小鼠抗大鼠PLB抗体(上海优宁维生物科技有限公司)，小鼠抗大鼠GRP78抗体(广州市格瑞林生物科技有限公司)，兔抗大鼠p-JNK抗体(SANTA CRUZ公司)，兔抗人Caspase-12抗体(Abcam公司)。

1.2方法

1.2.1慢病毒载体构建 SERCA2a表达上调的慢病毒载体构建及测定大鼠SERCA2a的序列查找和设计由广州易锦公司完成。重组的LV-SERCA2a和LV-SERCA2a(抑制载体)慢病毒表达载体由广州易锦公司合成，并经测序进行验证。之后行慢病毒滴度测定，制备完成后重组慢病毒在-80℃下保存。

1.2.2建模 随机选取40只小鼠中的10只……