乜英青

（青海省贵德县农畜产品质量检验检测中心 811799）

沙门氏菌为肠杆菌科革兰氏阴性杆菌，广泛存在于人和动物肠道内，是一种人畜共患性致病菌，严重威胁食品安全，国际兽疫局将其定为B 类传染病。鸡群感染沙门氏菌后可引发鸡白痢、鸡伤寒和禽副伤寒等疾病，且可通过垂直感染影响产蛋率和雏鸡存活率。随着我国养鸡业的现代化和规模化发展，鸡群免疫力逐步下降，依赖疫苗免疫或抗生素药物来防治，虽然抗生素能有效控制禽沙门氏菌，但由于药物使用不当造成菌株耐药性越来越严重。本文对贵德县青源土鸡养殖场沙门氏菌进行分离鉴定，并对分离到的菌株进行多种药物的敏感性试验，为当地鸡场抗菌药物的合理使用提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 培养基

营养琼脂培养基，SS 琼脂培养基，三糖铁琼脂，尿素酶生化鉴定管，蛋白胨水培养基，赖氨酸脱羧酶肉汤和氨基酸脱羧酶对照生化鉴定管均购自青岛高科技工业园海博生物技术有限公司。

1.1.2 病料来源

试验所用菌株来自贵德县青源土鸡养殖场所饲养的病死鸡，取其病料组织分离菌株共6 株。

1.1.3 试验药物

氧氟沙星、庆大霉素、阿莫西林、头孢唑啉、头孢噻肟、头孢拉定、恩诺沙星、阿米卡星、多西环素、卡那霉素、林可霉素、磷霉素、呋喃唑酮、复方新诺明共14 种药敏片均购自杭州滨和微生物试剂有限公司。

1.2 试验及方法

1.2.1 沙门氏菌分离试验

在实验室无菌条件下取病料组织接种于营养琼脂培养基和SS 琼脂培养基内，在37℃恒温培养箱内培养18～22h。在超净台内挑取0.5mm 单菌落进行革兰氏染色，显微镜下观察，挑取单个革兰氏阴性菌落。

1.2.2 沙门氏菌的鉴定试验

将分离到的革兰氏阴性短杆菌株进行编号，编名1～6 号，将这6 株菌株分别进行三糖铁试验（将待检菌株接种于三糖铁琼脂内，在37℃恒温培养箱内培养18～24h 后观察细菌形态和产气情况）、尿素酶试验（将待检菌株接种于尿素酶生化鉴定管内，在37℃恒温培养箱内培养18～24h 后观察试管颜色变化，若变红色或粉红色为阳性，若颜色不变或变黄色为阴性）、靛基质（吲哚）试验（将待检菌株接种于蛋白胨水培养基内，在37℃恒温培养箱内培养18～24h 后沿试管壁滴加数滴吲哚试剂，观察颜色变化，若变红色为阳性，呈黄色为阴性）、赖氨酸脱羧酶试验（将待检菌株分别接种于赖氨酸脱羧酶肉汤和氨基酸脱羧酶对照生化鉴定管内，在37℃恒温培养箱内培养18～24h 后观察培养基和试管颜色变化，若赖氨酸脱羧酶肉汤颜色变紫，而氨基酸脱羧酶对照颜色变黄为阳性，若两者均变黄为阴性）。

1.2.3 沙门氏菌的药敏试验

根据世界卫生组织建议的Kirby-Bauer 纸片法对分离到的6株沙门氏菌进行抗菌药物敏感性试验。用灭菌棒将LB 培养物均匀涂布于营养琼脂平板内，室温放置5min 后将药敏纸片平贴于琼脂表面，在37℃恒温培养箱内培养16～18h 后观察抑菌圈直径。判定结果为抑菌环直径d＞15mm 为高敏感度，抑菌环直径10mm＜d＜15mm 为中度敏感，抑菌环直径d＜10mm 为耐药。

2 结果与分析

2.1 沙门氏菌的分离鉴定结果

2.1.1 培养特性

将病料组织接种于营养琼脂培养基和SS 琼脂培养基内，于37℃培养18～22h 后发现营养琼脂培养基平板表面有许多单一，无色透明或半透明的针尖大小菌落，表面光滑、边缘整齐。SS 琼脂培养基表面呈灰色或中心呈黑色的圆形菌落。挑取单菌落进行革兰氏染色，于光学显微镜下观察，发现菌株为革兰氏阴性杆菌，两端钝圆，无芽孢，符合沙门氏菌的生长特性。

2.1.2 生化鉴定结果

由表1 可知，将分离到的6 株沙门氏菌进行生化鉴定试验，结果表明，在三糖铁试验中，培养基斜面变红，底层反应呈阳性，产酸，产硫化氢，该结果提示菌株均为沙门氏菌；在尿素酶试验中，试管颜色不变或呈黄色，均显示为阴性；在靛基质（吲哚）试验中，结果也均为阴性；在赖氨酸脱羧酶试验中，结果均为阳性。

2.2 沙门氏菌的药物敏感性试验

由表2 可知，分离到的6 株沙门氏菌对阿莫西林、恩诺沙星、卡那霉素、林可霉素和磷霉素的敏感度率为0，表明该鸡场的沙门氏菌对这5 种药物的耐药性较高，为多重耐药。而该鸡场的沙门氏菌对头孢噻肟、阿米卡星和多西环素的敏感率均超过80%，因此，上述几种药物可有效治疗该鸡场沙门氏菌。

表1 分离到的6 株沙门氏菌的生化鉴定试验结果

表2 分离到的6 株沙门氏菌的药物敏感性试验结果

3 讨论

本研究对分离鉴定到的6 株沙门氏菌进行14 种药物敏感性试验。结果显示，该区域鸡场沙门氏菌对头孢噻肟、阿米卡星和多西环素3 种药物具有高度敏感，而对阿莫西林、恩诺沙星、卡那霉素、林可霉素和磷霉素具有不同程度的耐药性。张丽娇（2020）对烟台市肉鸡养殖场的病鸡进行沙门氏菌分离鉴定和药敏试验发现，分离到的沙门氏菌对头孢噻呋和甲砜霉素高度敏感，对恩诺沙星和环丙沙星具有一定程度的耐药性[1]。张阿娥（2018）对洛江区部分养殖场的病鸡进行沙门氏菌分离鉴定和药敏试验发现，分离到的沙门氏菌对阿米卡星和恩诺沙星最为敏感，而阿莫西林和林可霉素等药物敏感范围较宽[2]。王晓艺等（2017）对山东省部分市县养殖场的病鸡进行沙门氏菌分离鉴定和药敏试验发现，分离到的沙门氏菌对多西环素最为敏感，而对阿莫西林、林可霉素和替米考星具有耐药性[3]。李强（2017）对宿豫区某散养户鸡场的病鸡进行沙门氏菌分离鉴定和药敏试验发现，分离到的沙门氏菌对氧氟沙星、头孢曲松和链霉素最为敏感[4]。上述试验结果不一致的原因与不同地区流行菌株不同及所使用的的抗菌药物种类不同有关。本试验结果显示，贵德县青源土鸡养殖场鸡源沙门氏菌对阿莫西林、恩诺沙星、卡那霉素、林可霉素和磷霉素的耐药性较强，说明之前可能存在使用量过多或滥用的现象。因此，笔者建议青海省贵德县在治疗禽沙门氏菌病时需要结合本地区药物敏感试验结果再合理选择抗生素进行治疗。为延缓细菌产生耐药性和缓解细菌的选择压力，鸡场可以交叉或轮换使用抗生素。在药物使用的同时需要对鸡舍定期消毒，提高鸡舍清洁度，定期监测沙门氏菌的耐药性，为合理选择和使用抗菌药物提供参考依据。