张淑萍 葛中东 张凯 夏宇欣 姜莉莉 樊兆斌*

（1，菏泽市食品药品检验检测研究院 274000；2，菏泽学院药学院 274715）

干扰素刺激基因（Interferon-stimulated genes，ISGs）是干扰素（IFN）下游的效应分子，IFN 作用于靶细胞表面受体后，通过一系列信号传导激活ISGs 的转录、表达[1，2]，在宿主免疫调节及抗病毒过程中发挥重要功能[3]。IFN 通过ISGs 发挥包括抗病毒、凋亡、抗增殖、抗肿瘤和免疫调节在内的多种细胞和生理功能[4]。不同的ISGs 可以针对病毒从入侵到释放的不同阶段发挥抑制作用[5]。以往针对ISGs 的研究主要集中在ISG15、Mx1、PKR 等[6-11]，对ISG12 的研究相对较少。ISG12 蛋白作为一个潜在的重要细胞因子，参与了机体的抗病毒过程。人巨细胞病毒（HCMV）、急性丙型肝炎病毒（HCV）感染后，ISG12表达水平均明显提高[12]，禽流感病毒（AIV）感染能引起鸡、鸭和小鼠体内的ISG12 mRNA 水平明显升高[13，14]。本研究通过RT-PCR 方法克隆了白来航鸡ISG12 基因，并对其编码蛋白进行生物信息学预测分析，研究结果为深入研究ISG12 编码蛋白功能及其抗病毒的分子机制提供有价值的参考资料。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

动物组织总RNA 提取试剂盒、Fast Quant cDNA 第一链合成试剂盒、2×Taq PCR Mastermix、D2000 Marker、凝胶回收试剂盒、DH5α 感受态、pGM-T 载体，质粒小提试剂盒等均购自天根生化科技有限公司；LB 培养基购自Solarbio 公司。

1.2 试验样品

白来航鸡的肝脏、脾脏组织。

1.3 引物设计

根据GenBank 已发表的原鸡ISG12 基因序列（登录号BN000223.1），利用primer premier 5.0 软件设计白来航鸡ISG12基因扩增引物ISG12-F/ISG12-R：ISG12-F:5'-ATGTCTGACCAG

AACGTCC-3'，ISG12-R：5'-GGACCGATGCTTCTTTCTA-3'，引物由华大基因有限公司合成。

1.4 ISG12 基因PCR 扩增

提取白来航鸡总RNA 并反转录为cDNA，以其为模板，用引物ISG12-F/ISG12-R 进行目的基因扩增。PCR 反应体系：cDNA 1μl，上游引物2μl，下游引物2μl，2×Taq PCR Master Mix 25μl，ddH2O 20μl，共50μl。……