王燕鸽高子涵李宗霖王康龙白雪李瑞芳有曼王红伟

(河南科技大学基础医学院药学系,河南省肝病防治工程技术中心,河南洛阳 471023)

肝癌是我国常见的恶性肿瘤,近年来发病率逐渐升高[1]。建立一种良好的循环肝癌细胞肝转移动物模型是研究和治疗肝癌的前提[2]。目前常见的肝癌建模方法有:化学诱导法、原位移植法、基因修饰法,化学诱导法会消耗大量的人力物力和时间;移植性肝癌模型不适用于所要研究的方向;所以,目前缺乏模拟人类循环肝癌细胞导致的肝内复发转移的动物模型[3]。研究发现,采用尾静脉注射的方法形成肝转移,从而成功构建出循环肝癌细胞肝转移动物模型[4]。肿瘤抑制基因p53 作为基因组的守卫者,在细胞应激反应中对细胞发挥多种作用,目前研究p53 基因治疗肝癌是一个突破点[5]。另有研究证明,p53 基因的突变与肝癌的病理密切相关,突变率与肝癌分化呈负相关。所以人工注射靶向突变人p53 基因,借此来调节小鼠的正常p53 基因的表达[6]。CRISPR/Cas9 基因编辑技术可以进行基因敲除,可编程性以及可同时编辑多个基因[7]。通过CRISPR/Cas9 基因编辑技术,敲除正常的p53 基因下调小鼠p53 基因的表达,构建出符合人类肝癌患病机制的动物模型[8]。本研究拟采用尾静脉注射突变p53 基因CRISPR/Cas9 质粒和H22 细胞的方法建立一种转移性肝癌小鼠模型。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

100 只 8 周龄 SPF 级雄性 BALB/c 小鼠,体重(20 ± 2)g,购自于华中科技大学同济医院实验动物中心【SCXK(苏)2017-0001】。饲养期间各组小鼠自由饮水,饲喂普通维持饲料由河南省正骨研究院动物实验室【SYXK(豫)2015-0001】提供。……