荣翠平宋双双侯雪芹∗

(1. 广州中医药大学,第二临床医学院,广州 510006; 2. 山东第一医科大学,药学院药理学研究所,山东泰安 271016)

中枢胆碱能神经系统损伤是阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)关系最密切的信号通路之一,乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)减少时可导致认知功能障碍[1]。与Ach 相似,催产素能神经元纤维末梢释放的催产素可作为神经递质,释放到大脑的不同脑区[2],并且催产素信号系统可能与毒蕈碱乙酰胆碱信号相互作用,调节认知状态过程[3]。催产素通过其受体发挥作用[4]。以胆碱能神经元为主的基底前脑Meynert 基底核(nucleus basalis of Meynert,NBM)中表达催产素受体[5],而且在与学习记忆密切相关的胆碱能投射靶区海马和皮质中也有催产素能神经纤维的传入[2,6]。因此,催产素受体信号通路可能与胆碱能通路存在关联。本文利用重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)和短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)技术干扰大鼠基底前脑催产素受体(oxytocin receptor,OXTR),研究OXTR 对学习记忆的影响,探讨OXTR 对胆碱能通路的调控作用,为认知行为中催产素相关机制的研究提供基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

65 只 SPF 级 3 月龄雌性 SD 大鼠,体重(240 ±10)g,购于济南朋悦实验动物繁殖有限公司【SCXK(鲁)20190003】。饲养在山东第一医科大学动物房【SYXK(鲁)20190022】,12 h 昼夜明暗交替,相对湿度(50 ± 5)%,室温(23 ± 2)℃,动物自由饮水和进食。动物实验经过山东第一医科大学实验动物伦理审查(审批号:2017047),动物管理和使用符合法规要求。

1.1.2 主要试剂与仪器

rAAV9-EGFP-Oxtr-shRNA (以下简称 OXTR-shRNA ) 腺 相 关 病 毒 ( 靶 点 序 列;CGGGTCAGTAGTGTCAAGCTT)由上海吉凯基因化学技术有限公司提供;抗荧光淬灭封片剂(谷歌生物,货号: G1401), 乙酰胆……