姜东凤，唐启伟，肖艳飞，任晓丽，皇甫和平*，石冬梅*

(1.河南牧业经济学院，河南 郑州450011；2.郑州新里程企业管理咨询有限公司，河南 郑州450011)

依据乳房组织和乳汁的病理变化可对奶牛临床型乳房炎做出诊断，但因引起该病的病原种类非常多，故通过检测、明确该病的病原种类，了解其药物敏感性，对该病的治疗具有重要意义。

检测牛乳房炎病原菌的经典方法有细菌分离鉴定，核酸检测等。PCR技术因其具有快速、灵敏等特点，在病原微生物的早期诊断中被广泛运用[1-2]。同时，随着全基因组测序项目的大量开展，几乎所有常见病原微生物的序列信息都已被公布，所以利用PCR扩增、序列比对来确定分离菌株种类已经成为鉴定病原微生物的一个准确方法[3]。而在同一反应体系里添加多种目的基因引物，达到同时扩增出多个基因片段的多重定量PCR，也成为筛选引起某一疾病的主要病原微生物的主要手段[4]。本研究采用细菌分离培养、染色镜检、PCR扩增测序、测序比对、药敏试验，又采用16联牛乳房炎病原菌核酸PCR-荧光探针法对太原市某奶牛场奶牛临床型乳房炎进行了研究，筛选该场乳房炎的主要致病菌，并为治疗提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 样品采集 乳样采自太原市某患有乳房炎的奶牛场，根据乳房组织和乳汁的病理变化共采集4头来自不同乳房的9份乳样，采集乳样时先消毒乳头，弃去前段乳汁，无菌取样10 mL，做好标记，4 ℃存放备用。

1.1.2 分子生物学软件及数据库 Primer 5.0用于引物设计、Seqman用于DNA序列和测序峰图分析、 NCBI (https://www.ncbi.nlm.nih.gov)用于基因信息查询和比对。……