懂陈文华， 邹玉顺， 赵银河

(云南农业大学作物农学与生物技术学院， 昆明 650201)

在拟南芥中，SEPALLATA1(SEP1),SEP1、SEP2、SEP3和SEP4被命名为E-class MADS-box基因[2-3,5-6]。研究表明SEP类SEP1、SEP2、SEP3和SEP4基因不仅在拟南芥花发育早期表达,还参与四轮花器官的发育，如果这些基因都突变,四轮花器官变成苞片,表明SEP类基因对花器官特征的调控起重要作用[2-3,5-7]。

图1 SEP-A全长基因的电泳

铁皮石斛为石斛之极品，野生“铁皮石斛”， 因其表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛具有独特的药用价值，研究发现石斛有增强体质、清热止痛、强筋健骨、降低血糖、抑制肿瘤、明亮眼目、润养肌肤、延年益寿等功效，被列为“中华九大仙草”之首，民间称其“救命仙草”。其花器官有特异性，主要产地在云南。本研究以铁皮石斛花序作为材料，参考张雪梅等[8]的方法进行。

1 材料与方法

1.1 材 料

采用材料为铁皮石斛(Dendrobiumcandidum)花器官，培养液的配置及所需设备参照文献[8]。

1.2 方 法

1.2.1RNA的提取

选用TransZol Plant，试剂盒参考张雪梅等[8]的方法，提取铁皮石斛花器官的RNA，严格按照试剂盒进行。

1.2.2特异性引物设计

3′-RACE引物参照张雪梅等[8]的方法进行。

总之，高职院校应当确立体育教育在质量立校战略中的应有地位，深刻认识并充分发挥体育教育在人才培养中的重要作用，使每一位学生都能具备积极的体育精神、良好的运动能力和健康的运动行为，促进学生全面发展。

SEP-A-F 5-AGGGAGAGAAAGAGAAAGAAAT-3；

SEP-A-R 5-ACAAGCCACACAAGTGCATAA-3；

SEP-B-F 5-TGAAAAGTGAGCGAACCAGA-3；

SEP-B-R 5- AACATAATAAGGTAGCAAACAAGAA-3；

1.2.3cDNA的合成

按SMART RACE cDNA Amplication Kit操作流程进行，具体方法参考文献[8]

1.2.4电泳检测，割胶回收目的片段

取5 μL的PCR产物进行克隆，克隆方法参照文献[7]进行，随机筛选白色菌落，送北京华大基因公司进行测序。……