隆建萍 闫有圣 杨 涛 马秀芬 毛红岩 张庆华 独晓燕 高华方*

1.甘肃省妇幼保健院(兰州，730050)；2.国家卫健委科学技术研究所

乳腺癌的发病率及死亡率在女性恶性肿瘤中均位居第一位[1-2]。三阴性乳腺癌(TNBC)是指缺乏雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及人类表皮生长因子-2(HER-2)表达的乳腺癌[3]，相对于其他分子分型乳腺癌其预后较差，且更早发生局部复发或者远期转移[4-5]。BRCA1/2是最早发现的遗传性乳腺癌易感基因[6-8]，在三阴性乳腺癌患者中BRCA1/2基因突变携带者率显著增高[9]。目前研究表明，除了BRCA1/2以外，已发现了十余种与乳腺癌相关的易感基因[10-12]。然而，即使对所有已知的乳腺癌相关基因进行综合分析，也只能在20%～30%具有明显遗传性癌症综合征临床特征的女性中找到明确的致病基因突变[13-14]。本研究应用二代测序的方法对于32例TNBC患者进行全外显子组测序，通过全外显子组分析完善中国人群中乳腺癌易感基因的突变谱，为乳腺癌的预防、相关遗传咨询及高危健康人群筛查提供依据。

1 对象和方法

1.1 对象

收集2018年1月-2019年12月在甘肃省妇幼保健院乳腺科确诊的乳腺侵入性导管癌患者50例，其中三阴性32例为研究对象，均为女性。病例入组标准：术后石蜡病理证实为浸润性乳腺癌；免疫组化证实ER<1%，PR<1%，HER-20～1+或者荧光原位杂交(FISH)证实为阴性；病历资料完整且有预后随访信息。所有入组患者均采集外周血5ml，EDTA抗凝，至于-80℃保存备用。本研究获得甘肃省妇幼保健院伦理委员会批准，临床资料收集和标本采集均获得患者知情同意。

1.2 全外显子组测序分析

1.2.1基因组DNA提取采用外周血基因组DNA提取试剂盒(QIAamp DNA Blood Mini Kit )提取患者外周血基因组DNA，利用核酸分析仪Qubit 2.0(Invitrogen)进行核酸定量，提取的基因组DNA在-20℃保存备用。

1.2.2全外显子组捕获测序基因组DNA经Covaris超声破碎仪随机打断成长度为180-280bp的片段，采用Agilent SureSelect Human All Exon V6试剂盒进行建库和外显子组捕获。……