刘蕴博

大肠埃希氏菌,通常又将其称为大肠杆菌,是人类动物肠道中普遍存在的正常菌群,但是部分血清型大肠杆菌也可导致腹泻发生。根据其临床特点、发病机制以及流血病学等特征,可将致泻性大肠杆菌分为肠致病性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌、肠产毒性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠黏附性大肠杆菌等五种类型［1］。其中肠致病性大肠杆菌可导致婴幼儿或5 岁以下儿童发生腹泻；肠出血性大肠杆菌具有普遍易感性,尤其多发于老年人和儿童；肠产毒性大肠杆菌不论是对成人,还是对小孩,均可导致其发病；肠侵袭性大肠杆菌可导致成人或大龄儿童出现菌痢样腹泻,肠黏附性大肠杆菌与小儿顽固性腹泻具有较大关系［2］。为了解肠致泻性大肠杆菌在腹泻患者中的分布情况,本文应用实时荧光PCR 检测技术对其展开了如下研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019 年10～12 月期间检查的150 例腹泻患者粪便标本为研究对象,其中男82 例,女68 例。所使用仪器包括实时荧光PCR 仪、高速离心机、恒温培养箱；培养基使用GN 增菌液,检测试剂包括肠产毒性大肠杆菌、肠黏附性大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌实时荧光诊断试剂盒。

1.2 方法 采集粪便标本后,首先使用GN 增菌液对其进行增菌处理,然后采集增菌液1 ml,以13000 r/min的速度对其进行离心处理,离心2 min 后去掉上清,将100 μl 的DNA 提取液充分混匀后,置于沸水中对其进行水浴,10 min 后再次以13000 r/min 的速度离心5 min,采集上清液作为实时荧光PCR 反应的模板DNA,然后应用实时荧光PCR 反应体系和扩增程序对其进行相应操作。……