邓秘 龙霖梓 谭令 黄明艳 曲华 付长庚

活血解毒中药配伍由赤芍、川芎、黄连三味中药组成，该配伍在临床上广泛用于改善冠心病的临床症状及预后[1]。课题组前期通过实验证明活血解毒中药配伍可通过抑制炎症反应、增强超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性等途径改善大鼠心功能[2-4]，但对急性心肌梗死后冠脉无复流的研究尚未涉足。故本研究采用缺血再灌注方法制备大鼠冠脉无复流模型，观察活血解毒中药配伍通过调控心肌细胞过度自噬，减轻无复流心肌损伤的作用机制，以期为其临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康Wistar大鼠，雄性，SPF级，体质量200～220 g(购自常州卡文斯，动物许可证号码：SCXK(苏)2016-0010)，共96只，饲养于中国中医科学院西苑医院SPF级动物房，白夜交替时间为12小时，标准饲料喂养，自由取食及饮水。

1.2 实验药物

活血解毒中药组成为川芎10 g、赤芍10 g、黄连10 g，由江阴天江药业有限公司制备成颗粒，然后以生理盐水配制，高压灭菌后于-20 ℃条件下贮存；阿司匹林肠溶片(沈阳奥吉娜药业有限公司提供，批号：151001，规格：100 mg/片)。

1.3 主要试剂及仪器

氯化硝基四氮唑蓝(国药集团，298-83-9)、硫黄素S(源叶生物，1326-12-1)、透射电子显微镜(JEOL，JEM1230)、激光共聚焦显微镜(Nikon，C2)、全自动生化分析仪(OL YMPUS，AU-400)、PCR仪(东胜创新生物科技有限公司，EDC-810)、水平电泳仪(北京君意东方电泳设备有限公司，JY300)、抗自噬效应蛋白Beclin-1抗体(abcam，ab62557)、抗B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2，Bcl 2)抗体(abcam，ab196495)、抗微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3，LC3)抗体(CST，12741)。

1.4 实验分组及给药方法

将96只大鼠随机分为6组，包括假手术组(Sham组)、冠脉无复流模型组(I/R组)、活血解毒中药低剂量组、活血解毒中药中剂量组、活血解毒中药高剂量组和阳性药物对照组，每组16只。……