韩丽丽，周维肖，张淑群

(西安交通大学第二附属医院：1. 肿瘤病院；2. 检验科，陕西西安 710004)

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，发病率逐年升高[1]。乳腺癌的预后与其分子分型密切相关。三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer, TNBC)是一种以雌激素受体(estrogen receptor, ER)、孕激素受体(progesterone receptor, PR)、人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2, HER2) 表达缺失或降低为特征的分子亚型，约占所有乳腺癌的12%～17%[2]，以高度侵袭性为特征，与患者不良临床病理肿瘤特征密切相关[3]。由于TNBC具有高复发、转移的特点，并且内分泌治疗及靶向HER2对该肿瘤亚型治疗效果不佳，治疗手段有限，因此预后较差[4]。因此，进一步揭示TNBC发生发展的可能机制，探寻其新的治疗靶点是亟待解决的问题。

负性延长因子(negative elongation factor, NELF)包含4个多功能部件亚单位，NELFA、NELFB、NELFC和NELFE均参与MYC信号的调控[5]。NELFE是RNA聚合酶Ⅱ(RNA polymeraseⅡ, PolⅡ)的关键调节因子[6-7]。最近的研究表明，NELFE通过调节N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2, NDRG2)等促进肝癌、胰腺癌发生发展[8-10]。然而，NELFE在包括TNBC在内的乳腺癌中的表达模式和潜在的生理功能，尚未见文献报道。本研究揭示，NELFE可能通过抑制NDRG2表达促进TNBC细胞的迁移、侵袭。

1 材料与方法

1.1 细胞株及主要试剂TNBC细胞株MDA-MB-231购自中国上海富衡细胞中心； DMEM培养基购自美国Sigma公司；胰蛋白酶购自Sigma公司；胎牛血清购自美国Thermo Fisher科技公司；RNA提取试剂Trizol购自美国Thermo Fisher科技公司；Western blotting所用NELFE、NDRG2和GAPDH的一抗购自美国Abcam公司，二抗购自北京博奥森公司；NDRG2启动子报告基因由科佰生物合成提供；ov-NELFE，NELFE突变载体(MUT-NELFE)或其空白对照慢病毒载体(ov-Ctrl), ov-NDRG2或其空白对照慢病毒载体(ov-NC)由吉玛公司设计合成。

1.2 细胞培养MDA-MB-231细胞培养在含100 mL/L胎牛血清的DMEM高糖培养基中，置于37 ℃、50 mL/L CO2细胞培养箱中，1.25 g/L胰酶2～3 d消化传代1次。……