肺腺癌miR-195的表达及靶基因筛选*
2021-05-13潘民主莫慧慧区莹莹明火清杨日荣
罗 裕,潘民主,莫慧慧,区莹莹,明火清,韦 想,黄 荣,杨日荣
1.广西壮族自治区人民医院检验科,广西南宁 530021;2.广西医科大学第一临床医学院,广西南宁 530021;3.广西医科大学基础医学院免疫学教研室,广西南宁 530021
肺癌是常见的恶性肿瘤之一,其发生、发展是多因素的过程,涉及较多基因与蛋白[1]。而微小RNA(miRNA)作为单链非编码RNA,广泛存在于真核生物体内,其通过与靶基因的mRNA 3′-非翻译区(3′UTR)结合,降解mRNA或抑制其翻译,调控多种细胞的功能[2-3]。miRNA失调对许多癌症有影响,如结直肠癌、乳腺癌、宫颈癌、胃癌、肝细胞癌及前列腺癌等[4-8]。本研究通过检测肺腺癌中miR-195的表达,研究miR-195靶基因间的相互联系,分析靶基因的生存预后,以探讨其在肺腺癌中的作用,为肺腺癌研究提供新的思路。
1 资料与方法
1.1一般资料 收集广西壮族自治区人民医院11例临床肺腺癌患者的标本,包括癌组织与癌旁正常组织,标本离体后在最短时间内将癌组织及癌旁正常组织切成直径0.5 cm的小块,分别装入已编号的灭菌冻存管中,迅速放入液氮转移罐,做好长期保存准备。标本存放好后,登记标本编号、住院号、肿瘤类型、取材数量。本研究通过广西壮族自治区人民医院伦理委员会的批准,并在患者知情同意情况下进行标本收集。
1.2方法
1.2.1实时荧光定量PCR检测miR-195在临床标本中的表达 取约0.1 g组织标本放入冰预冷的含1.5 mL RNA裂解液的匀浆器中,进行总RNA提取。反转录取2 μg的RNA、3 μL随机引物,补DEPC水至24 μL,放入PCR仪中。70 ℃热变性15 min,迅速冰浴3 min。按照说明书加入其他试剂,每管液体总体积约40 μL,将混合物短暂离心后置于PCR仪中,37 ℃ 90 min;……
