刘洁

阿尔茨海默病是一种起病隐匿的进行性发展的神经退行性疾病，主要发生于>85岁的老人[1]，对老年人的晚年身体健康及精神健康造成严重伤害，给社会和家庭带来了极大负担。研究表明阿尔茨海默病发病与Aβ1-42 (amyloid β1-42，Aβ1-42)在脑血管内皮沉积，导致脑血管内皮细胞的衰老死亡有关[2]。血管衰老会改变血管的形态和功能，如：血管内膜增厚以及内皮功能失调等[3]。血管内皮细胞是血管内皮的主要成分，对血管的生成、收缩等具有重要调节作用，可一定程度维持血管系统稳定[4]。血管内皮生长因子(vascular endothelial grow the factor,VEGF)是机体内最重要的血管生成因子[5]，可与血管内皮生长因子受体1(vascular endothelial growth factor receptor1，VEGFR1)结合促进新生血管生成。研究表明PI3K/Akt/mTOR信号轴中效应分子p-Akt、p-mTOR等蛋白在婴幼儿增生期血管瘤组织中的表达水平明显高于消退期，对血管生成具有重要作用[6]。本研究通过沉默VEGFR1基因在HBMEC细胞中表达并用Aβ1-42诱导细胞衰老，检测4组细胞的衰老及VEGFR1、PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况，探讨VEGFR1在人脑微血管内皮细胞衰老中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料 人脑微血管内皮细胞HBMEC，产品编号为CL0116，购自丰晖生物有限公司；pGPU6/GFP/Neo质粒，货号：pGPU6/GFP/Neo，购自BioVector质粒载体菌种细胞基因保藏中心。

1.2 仪器与试剂 Aβ1-42多肽，货号：04010011827，规格：5 mg，95%，购自苏州强耀生物科技有限公司；人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(Cell Counting Kit-8，CCK-8)ELISA Kit，货号：69-80160，购自武汉默沙克生物科技有限公司； β-半乳糖苷酶染色试剂盒，货号：G1580-100T，购自北京索莱宝有限公司；LipofectaminTM 2000，货号为：rs374987523，购自美国Invitrogen公司；鼠抗人VEGFR1、p-Akt、p-mTOR、PI3K单克隆抗体购自于美国Sigma公司，货号分别为：RAB1088、RAB1435、RAB1517、RAB1532；PVDF膜购于上海生工生物工程有限公司，货号：F619537；辣……