李曲文,罗宏活，黄梦颖，谢芳钦，林震宇，徐海滨，翁顺太

猪链球菌最早见于荷兰 (1951)和英国(1954)报道，是一种能引起猪脑膜炎、关节炎、心内 膜炎、败血症和肺炎的病原菌，并可以引起人的感染，是一种呈世界广泛分布的人兽共患病[1]。 猪链球菌根据荚膜多糖抗原的不同共分为33个血清型。在猪和人体以猪链球菌血清型2型最常被分离到且是致病力最强，不同的血清型也不断的被发现可以引起人的感染，如血清1/2 、7 、9 、14，31 等也能引起人猪链球菌感染[2]。本文通过实验室诊断对1例猪链球菌5型的病例进行诊断及分子分型分析，阐述如下。

1 材料与方法

1.1菌株来源 菌株分离来自福建三明邓某某血液培养分离菌株。

1.2主要试剂和仪器 血平板、VITEK2全自动微生物分析系统、GP卡、革兰染色液购自广东环凯公司，α-氰基-4-羟基肉桂酸基质(HCCA)购自德国 Bruker 公司，甲酸、乙腈和三氟乙酸购自美国Sigma 公司。 分子生物学试剂购自TaKaRa宝生物工程有限公司，引物序列及测序均由铂尚生物技术有限公司完成，MALDI-TOF MS -Microflex TM LT 型(德国Bruker公司)。

1.3方法 通过血培养分离可疑菌株，并对分离菌株进行涂片革兰染色镜检及常规的生化鉴定以及常规PCR鉴定猪链球菌属基因(16SrRNA)、猪链球菌33(1～31型,33型,1/2型)种血清型基因鉴定；猪链球菌毒力相关的谷氨酸脱氢酶(gdh)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、胞外因子(ef)、溶血素(sly)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶 (gapdh)、纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(fbps)及毒力相关序列(orf2)等基因、质谱鉴定等等。MLST分型用PCR扩增aroA、cpn60、dpr、gki、mutS、recA、thrA，PCR产物用1%的琼脂糖凝胶电泳后测序。序列经提交MLST网站(http://pubmlst.org/ssuis/)，确定序列分型(SequenceType,ST)型别，各基因引物序列见表1、表2，参考文献[3-5]。……