刘 娟 张俊辉 王 芹 周 影 钱 锟 祝长杰

(吉林省蚕业科学研究院，吉林吉林 132012)

柞蚕蛹虫草中含有丰富的蛋白质及氨基酸，蛋白质含量为30%，氨基酸含量为22%，还含有冬虫夏草所不含有的抗癌物质虫草素，所以蛹虫草是冬虫夏草的良好替代品。在柞蚕蛹虫草的批量生产中，蛹虫草菌的保藏方法对柞蚕蛹虫草的产量及活性物质含量影响较大。本文对蛹虫草菌的保藏方法及不同保藏方法对蛹虫草菌生产能力的影响作一探讨。

1 材料与方法

1.1 供试材料

蛹虫草菌，柞蚕蛹，均由吉林省蚕业科学研究院提供。PDA培养基：马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基(potato dextrose agar medium，PDA)；丰富培养基：葡萄糖2%，蛋白胨2%，磷酸钠0.25%，磷酸氢二钾0.15%，硫酸镁0.075%，马铃薯15%；米饭培养基：大米20%，大麦35%，糙米20%，黄豆25%。

1.2 试剂与仪器

试剂：乙腈、甲醇购于美国Fisher试剂公司，虫草素标准品购于国药集团。仪器：Agilent 1290超高效液相色谱仪，KOKUSAN H-19F离心机，0.45μm水系滤膜等。

1.3 试验方法

1.3.1 蛹虫草菌冷冻保藏

蛹虫草菌接种于米饭培养基中，接种量为15%，待蛹虫草菌长满米饭培养基后继续培养10 d，放置于-19 ℃冷冻保藏。

1.3.2 冷冻保藏蛹虫草菌活化

取-19 ℃冷冻保藏的蛹虫草菌，放置于-4 ℃的环境中进行活化12 h再应用于试验中。

1.3.3 柞蚕蛹虫草培育

取固体培养基上生长旺盛、转色能力强的蛹虫草菌菌块(约黄豆粒大小)接种于100 mL PDA液体培养基中，23 ℃避光、120 r/min摇床培养96 h，得到蛹虫草菌菌丝球悬液。每只柞蚕蛹接种量为0.2～0.3 mL。在适当培养条件下进行柞蚕蛹虫草的培育(吉林省蚕业科学研究院专利技术)，测定蛹虫草菌的僵化率和出草率，得到柞蚕蛹虫草。……