郭 红 张全乐 巩苓苓 陈 蔚

河北省沧州中西医结合医院消化科 (河北 沧州， 061001)

肝癌由于具有高的复发率和转移，预后较差。特别是对晚期肝癌患者，无法进行外科切除，使用药物治疗是主要的治疗策略[1]。中药在治疗恶性肿瘤中取得了长足的进步，许多重要制剂也被应用于治疗肝癌，已经有临床研究显示复方苦参注射液联合奥沙利铂化疗可以提高治疗效果[2]，但是关于其治疗胃癌的机制尚不清楚，分析复方苦参注射液抑制肝癌的机制对于临床更好的使用其治疗肝癌具有重要意义。PI3K/AKT通路是促进肝癌发生和进展的重要通路，抑制PI3K/AKT途径是治疗肝癌的有效策略[3]，并且有研究显示苦参碱可通过抑制PI3K/AKT通路促进肺癌的凋亡的作用[4]。本文主要分析复方苦参注射液对人肝癌SMMC-7221细胞体外增殖、转移和侵袭的抑制作用及其通过PI3K/AKT的影响机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料和仪器 人肝癌细胞系SMMC-7221(美国ATCC公司)。DMEM培养基(美国Invitrogen公司)。复方苦参注射液(国药准字Z14021231，山西振东制药股份有限公司)。PI3K抑制剂LY294002(中国Selleck公司)。PCR引物由Genewiz公司(中国)设计和合成。Trizol试剂(美国Invitrogen公司)。逆转录cDNA试剂盒和SYBR Green PCR Master Mix qPCR试剂盒(瑞士Roche公司)。Anti-PI3K、anti-AKT、anti-GSK-3β(美国Abcam公司)。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)和结晶紫染色试剂盒(中国碧云天生物技术研究所)。Matrigel(美国BD Biosciences公司)。PVDF膜(美国BioRad公司)。ABI 7500 PCR检测系统(美国Life technology公司)。倒置显微镜Olympus IX71、显微镜(日本奥林巴斯公司)。

1.2 细胞培养、分组和转染 SMMC-7221细胞加入DMEM培养基中37℃、 5% CO2、相对湿度100%条件下培养，分别加入终浓度为0、20、40、80、160 μl/ml复方苦参注射液，培养24、48、72 h后CCK-8法检测细胞活力，筛选最适实验浓度。……