鄢雯 李囡 王世全 曾令娥 刘立新

(首都医科大学燕京医学院临床医学学系,北京 101300)

肾脏纤维化是高血压引起靶器官损伤的重要病理变化，主要由于大量胶原蛋白沉积，最终取代正常肾脏结构，导致肾小球硬化及肾小管间质的纤维化，造成肾脏功能进行性丧失[1-2]。泛素蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system，UPS)是真核细胞内调节蛋白质降解的主要途径之一。β5i是UPS蛋白酶解中心的核心催化亚基[3]，可产生糜蛋白酶样活性。我们发现免疫蛋白酶体亚基β5i参与盐敏感型高血压的小鼠心肌重构的病理过程[4]，但其在肾脏纤维化的作用尚不甚清楚。本研究通过建立醋酸脱氧皮质酮(desoxycorticosterone acetate,DOCA)-盐敏感高血压模型，以特异性蛋白酶体抑制剂PR957进行治疗，通过对小鼠血压及肾组织纤维化指标表达变化的研究，观察和分析β5i对DOCA-盐敏感型高血压小鼠肾脏纤维化的影响。报告如下。

1 材料和方法

1.1实验动物 C57BL/6J小鼠，雄性，8～10周龄，体重(23±2)g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2012～0001。遵照首都医科大学生物医学伦理委员会实验动物相关伦理标准，实验前采用普通饲料适应性喂养小鼠1周，实验期间小鼠自由饮水和进食。

1.2实验试剂和仪器 (1)主要试剂为：DOCA(Sigma)；PR-957(Selleck Chemicals)；总RNA提取及及TaKaRa逆转录试剂盒(Promega)；Trizol(Invitrogen)；SYBR Green(TaKaRa)；Masson三色染色试剂盒(Solarbio)。(2)主要仪器为：BP 98A鼠尾套管血压计(Softron)；real-time聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)仪(Bio-Rad)；TP1020半封闭全自动组织脱水机(Leica)。

1.3方法

1.3.1动物模型复制及分组 根据实验设计，将C57BL/6J雄性小鼠随机分为四组(每组n=8)：假手术组，PR-957组，DOCA-salt组和DOCA-salt+PR-957组。模型制备步骤[5]：(1)三溴乙醇(12 ml/kg)腹腔注射麻醉小鼠，在位于脊柱左侧肋缘下1 cm处作一长约1 cm的切口，暴露肾脏，结扎肾门处血管，剥离肾被膜，切除左肾后缝合肌肉和皮肤；……