许 洁，张科平，林丹义，陈 洁，朱小兰，骆新兰

二代测序(next generation sequencing, NGS)技术能够同时对上百万乃至数十亿个DNA分子进行测序，相较于传统测序技术，其速度较快、一次可检测大量靶基因，因而广泛应用于染色体非整倍体无创产前筛查、肿瘤靶向治疗基因突变检测、遗传性肿瘤检测、病原微生物及宏基因组检测等领域。影响NGS结果的限制性因素包括：平台类别、靶区域富集方法、文库构建及扩增效率、测序数据量、生物信息学分析流程等。NGS流程主要包括3个部分：文库制备、测序和数据分析，建库是NGS实验第一步，终文库质量的好坏直接影响后续测序仪上机实验及数据分析。目前常用的建库方法有杂交捕获和扩增子建库，无论哪种建库方法都会运用PCR方法，引物二聚体是PCR实验过程中引物的3′端间相互错配扩增形成的，若终文库引物二聚体含量高，占用测序数据量，直接影响测序数据质量。如何有效去除引物二聚体，同时不影响终文库质量，是众多实验者考虑的问题，本实验应用AMPureXP beads对福尔马林固定石蜡包埋标本终文库引物二聚体进行纯化，得到较满意的结果，现介绍如下。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂石蜡标本DNA提取试剂盒QIAamp DNA FFPE Tissue Kit(德国，Qiagen，56404)，人多基因突变检测通用试剂盒(燃石医学，RS03F-12)，人多基因突变检测捕获探针-朗克(燃石医学，RS010-12，V3)，人多基因突变检测捕获探针-凯康(燃石医学，RS032-12，V2)，DNA 1000 Reagents(Agilent，5067-1504)，QUBIT dsDNA HS Assay(Life，Q32856)，AMPureXP beads(Beckman，A63882)，人类EGFR基因突变检测试剂盒(厦门艾德生物公司，8.0120201 W012B)，人类KRAS基因突变检测试剂盒(厦门艾德生物公司，8.0120102W006B)；高通……