翁丹枫，傅晓丹，陈淑惠，张真真

骨肿瘤病理大切片可以观察组织全貌，准确评估病灶大小、侵袭范围以及手术切缘，对于确定骨肿瘤的边界和临床预后非常重要。但骨组织中丰富的钙盐导致完整制片困难，尤其是大切片的制作。普通酸性脱钙液因破坏细胞及组织结构，影响染色、镜下观察和分子检测，已不适用于日常工作，而EDTA脱钙液性质温和，能有效保护组织内的核酸和组织抗原，日益成为骨标本处理的首选[1-2]。本科室将EDTA脱钙液应用于骨组织大切片制片及染色过程，总结了骨组织大切片的制作方法，以期在临床骨病变标本的处理中推广应用。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂锯骨机(昊鹰HYTW-300)，脱水机(Thermo Pathcenter)，多功能染色机(Leica ST5020)，磁力搅拌器(博大HMS-901)，恒温摇床(南荣NRY-100C)，平推式切片机(REM-710，大和公司)，10%中性福尔马林，不锈钢包埋模具(6.5 cm×4.5 cm)、包埋脱水盒(6.5 cm×4.5 cm×1.0 cm)，载玻片(5.5 cm×5.1 cm)(图1)，盖玻片(5.5 cm×4.8 cm)。20%EDTA脱钙液的配制：取乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na，购自上海泸试化工公司，货号6381-92-6)250 g于烧杯中，倒入磷酸盐缓冲液至总体积1 000 mL；置于磁力搅拌器37 ℃恒温搅拌，加入25 g氢氧化钠继续搅拌至完全溶解；测pH值为7.2～7.6。

1.2 取材与固定选取福建医科大学附属第一医院病理科接收的股骨头坏死和骨肿瘤标本20例，将骨组织标本用锯骨机沿着矢状面最大切面锯开，锯成大小4 cm×6 cm、2～8 mm厚的骨薄片，用10%中性福尔马林室温下固定24～48 h。

1.3 脱钙固定好的骨组织切片完全浸没于20%EDTA脱钙液中，置于37 ℃恒温摇床(HNY-100B，长沙巴跃仪器公司)，以60 r/min匀速缓慢摇动，期间每隔2天换脱钙液，直至尖镊较易刺入骨组织为脱钙完成。……