朱婷婷，胡青芳，刘学玉，孙德刚，辛秉昌，高嫘娜

人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells, hDPSCs)是一类与骨髓间充质干细胞有着极其相似的免疫表型及形成矿化结节能力的细胞，可自我更新和多向分化[1]。同时，hDPSCs容易培养和低免疫原性，被认为是组织工程学理想的种子细胞，目前其不仅应用于牙齿相关疾病[2]，还可以用于糖尿病、心脏疾病和关节炎等疾病的治疗[3-5]。然而，hDPSCs经体外长期培养易发生衰老，影响其增殖速度、多向分化潜能，进而限制其后续应用[6]。因此，探究hDPSCs的衰老机制，探索hDPSCs发生衰老过程中关键作用因子，对于增强hDPSCs的稳定性和拓展其临床应用前景具有重要意义。

近期研究发现，长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)参与调控hDPSCs的衰老及分化过程[7-9]。如，在衰老hDPSCs中lncRNA FAM96B低表达，而过表达lncRNA FAM96B后可明显减少SA-β-gal阳性细胞数、增强hDPSCs矿化能力以及促进其成骨分化[9]。另外，lncRNA母源性印记基因3(maternal imprinting gene 3, MEG3)异常表达与人脂肪干细胞衰老密切相关[10]，然而lncRNA MEG3对hDPSCs衰老的作用机制尚未有研究证实。为此，本实验旨在通过分析经脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)处理后hDPSCs衰老过程中lncRNA MEG3表达量的变化规律，阐明lncRNA MEG3与hDPSCs衰老的关系，为研究hDPSCs衰老的相关调控机制提供实验依据，以及对牙齿相关疾病的细胞治疗提供新的理论依据和技术支持。

1 材料与方法

1.1 试剂及仪器DMEM培养基、10%胎牛血清、青霉素-链霉素、LPS和SA-β-gal溶液均购于美国Sigma-Aldrich公司；lncRNA MEG3 shRNA(sh-MEG3)、ROCK1 siRNA(si-ROCK1)、pcDNA3.1-ROCK1(OE-ROCK1)及空白质粒均由中国GeneChem公司构建；Trizol试剂盒和RIPA裂解液均购于天根生化科技(北京)公司；Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司；SYBR GREEN Master Mix Kit购于北京索莱宝科技公司；Prime-ScriptTM试剂盒购于日本Takara公司；BCA试剂盒购自北京百奥莱博科技公司；……