汤永峰，张 珦，周鹤鸣，郑燕影，李 惠

子宫内膜癌是女性高发的恶性肿瘤，发病率逐年增高[1-2]。子宫内膜癌根据有无激素依赖分为两型：Ⅰ型包括子宫内膜样癌和黏液癌，约占子宫内膜癌的85%；Ⅱ型包括高级别浆液性癌(占3%～10%)和透明细胞癌(<2%)等。组织学分型并不能很好地反应子宫内膜癌的生物学行为和预后，需要新的分型分层标准。2013年美国癌症基因组图谱(TCGA)项目将子宫内膜癌分为四种分子亚型：POLE超突变型、微卫星不稳定高突变型(microsatellite instability hypermutated, MSI-H)、高拷贝数型(copy number-high, CN-H)和低拷贝数型(copy number-low, CN-L)。目前关于子宫内膜癌分子分型在临床应用的研究越来越多[3-6]，由于子宫内膜透明细胞癌(endometrial clear cell carcinoma, ECCC)病例数较少[7]，其分子分型在临床上的应用国内尚未见报道。肿瘤免疫治疗是近年研究热点，以抗PD-1/PD-L1为代表的免疫治疗在MSI-H/错配修复缺陷(mismatch repair-deficiency, MMR-D)及高浓度肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte, TIL)的肿瘤中显示较好的疗效。研究显示：高达29%的ECCC患者为MSI，使免疫治疗成为ECCC潜在的治疗选择[8]。本文旨在探讨ECCC分子分型的临床应用及其与PD-L1表达的关系，为ECCC的免疫治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料收集2012年1月～2019年12月南京市妇幼保健院病理科存档的15例ECCC手术标本，所有病例均经2位高年资专科病理医师确诊。患者年龄37～78岁，中位年龄60岁。其中5例有子宫颈浸润，4例淋巴结有转移。

1.2 方法

1.2.1免疫组化 所有标本均经10%中性福尔马林固定，常规包埋、3 μm厚切片，采用免疫组化EnVision两步法检测p53、MLH1、MSH2、MSH6、PMS2和PD-L1(22C3)蛋白表达，PD-L1(22C3)抗体购自丹麦DAKO公司，其余抗体均购自福州迈新公司。用PBS作为阴性对照。MLH1、MSH2、MSH6和PMS2阳性染色定位于细胞核，在阳性内对照(如肿瘤间质淋巴细胞)表达正常的情况下所有肿瘤细胞染色阴性判读为MMR-D，否则为错配修复完整(mismatch repair-proficiency, MMR-P)。p53判读标准：大于70%的肿瘤细胞中有强的细胞核染色或肿瘤细胞染色完全阴性为p53突变型，否则为野生型。PD-L1染色结果采用CPS评分：即PD-L1染色细胞(包括肿瘤细胞、淋巴细胞、巨噬细胞)数与样本中所有活肿瘤细胞数的比值，乘以100。阳性定义为CPS评分≥10。

1.2.2POLE基因突变检测 常规提取、纯化DNA后，将提取的DNA送至北京擎科生物公司进行Sanger测序：设计合成引物，PCR扩增后用ABI-3730xl测序仪进行测序，Data collection软件自动进行数据处理和分析。DNA sequencing analysis 5.1软件分析获取测序电泳图和序列。将样本序列与Genebank标准序列进行比对，观察序列有无突变。

1.3 统计学分析所有数据采用SPSS 22.0软件进行统计学分析；……