俞 杨，姚 嘉，杨时平，李冠乔

ZEB1、ZEB2是E-cadherin的候选阻遏物。ZEB1、ZEB2蛋白参与包括骨骼组织、平滑肌组织、神经组织等多种组织的分化[1-2]。ZEB1、ZEB2在多种肿瘤中异常表达，包括胰腺癌[3]、肺癌[4]、肝癌[5]、结肠癌[6]和乳腺癌[7]。近年研究显示，miR-32-5p参与调控胰腺癌、前列腺癌、肝细胞癌等肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为，与肿瘤的发生、发展密切相关，且在胃瘤、骨肉瘤和结直肠癌等不同肿瘤中起抑癌或致癌作用[8-10]。目前，miR-32-5p在乳腺癌中的表达尚不明确。本实验旨在探讨miR-32-5p及ZEB1、ZEB2在乳腺癌MCF-7细胞系中的作用，并分析两者间的关联性。

1 材料与方法

1.1 材料本实验入组的样本选自2019年1月～2019年6月就诊于海南省人民医院的女性乳腺癌患者，所有患者均经病理学确诊；包括癌旁组织30例和乳腺癌组织30例。本实验经我院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2 细胞培养MCF-10A、MDA-MB-231和MCF-7细胞购于北京国家实验细胞资源共享平台。MCF-10A给予100 ng/mL霍乱毒素及1%P/S培养，MDA-MB-231用含有10%胎牛血清(浙江天杭生物公司)的L-15培养基(Gibco，美国)进行培养。MCF-7用含有10%胎牛血清(浙江天杭生物公司)的MEM培养基(Gibco，美国)进行培养。

1.3 qRT-PCR检测通过qRT-PCR法检测癌旁组织和乳腺癌组织中ZEB1、ZEB2和miR-32-5p的表达水平；检测乳腺癌细胞系MCF-10A、MDA-MB-231和MCF-7中ZEB1和ZEB2的表达水平，以及MCF-7细胞中ZEB1和ZEB2敲除效率。利用Trizonl(上海生工公司)提取组织或细胞中的RNA，用逆转录试剂盒(北京天根生化科技公司)逆转录合成cDNA，荧光染料法(SYB Green，罗氏，美国)进行实时定量PCR检测，QuantStudio 3仪器(Applied Biosystem，美国)检测荧光信号。miR-32-5p、U6、ZEB1、ZEB2和GAPDH引物由上海生工公司合成。miR-32-5p表达以U6为内参，ZEB1和ZEB2表达以GAPDH为内参。……