巩婵婵，李艳青，展 瑞，汤 颖，陆夏良

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，发病率以每年0.2%～8%的幅度上升，严重威胁女性身心健康[1-2]。肿瘤细胞多药耐药的产生是导致乳腺癌治疗失败的主要原因之一，因此，研究乳腺癌细胞耐药的分子机制，对发现新的治疗靶点具有重要意义[3]。PAK5是p21激活激酶(p21-activated kinase, PAK)家族中的成员之一[4]。研究表明，PAK5可通过调控NF-κB促进乳腺癌细胞增殖，并参与乳腺癌细胞侵袭、迁移过程[5]。此外，PAK5还参与了肝癌细胞及食管鳞状细胞癌对顺铂的耐药[6-7]，PAK5表达可使卵巢癌细胞对紫杉醇产生耐药[8]。因此，PAK5很可能参与了肿瘤细胞的耐药进程，而PAK5在乳腺癌细胞耐药中的机制仍不清楚。本实验旨在验证PAK5在乳腺癌细胞产生耐药中的作用，并探讨PAK5对β-catenin通路的调控作用。

1 材料与方法

1.1 材料人乳腺癌细胞BT-549、MDA-MB-231购自中国科学院细胞所。RPMI-1640培养基购自美国GIBCO公司，L-15培养基、CCK-8细胞增殖试剂盒购自凯基生物公司；无支原体胎牛血清购自中国杭州四季青公司；胰酶购自美国Sigma公司；抗PAK5抗体购自美国Abcam公司，β-catenin抗体购自Santa Cruz公司，PAK5过表达质粒购自上海艾博思生物公司。PAK5干扰序列购自上海吉玛基因公司。BCA蛋白浓度测定试剂盒购自南京碧云天公司；X-treme GENE HP DNA Transfection Reagent转染试剂购自Roche公司。

1.2 细胞培养与耐药株诱导乳腺癌细胞株BT-549、MDA-MB-231分别于含10%胎牛血清的RPMI-1640、L-15培养基中，加入适量青霉素-链霉素溶液(双抗)，在含5%CO2、37 ℃恒温培养箱中培养。取对数生长状态良好的BT-549和MDA-MB-231细胞常规胰酶消化后，离心弃上清，后重悬取约106个细胞接种于含阿霉素……