李 丹吴海红岳 玲冯秀丽吕春晶

(1.辽宁省农业科学院花卉研究所，辽宁 沈阳 110161； 2.辽宁省果树科学研究所，辽宁 营口 115009)

大花卷丹属百合科百合属植物，花下垂，花瓣呈桔红色，反卷，有斑点。原产我国东北、华北、陕北地区，适应性强，有很强的耐寒性和耐荫性，在东北地区可露地越冬。可以直接用于园林景观，也可作为盆花、切花的育种亲本，鳞片亦可食用和药用。近年来，由于人工采挖严重，大花卷丹资源遭到破坏，对大花卷丹进行高效的繁殖保护势在必行，组织培养是有效快速的繁殖方法。本试验以大花卷丹的鳞片作为外植体，对小鳞茎的诱导、增殖、生根以及移栽进行研究，找出适合各个生长阶段的培养基配方，意在建立一套完整的大花卷丹组培快繁体系。

1 材料与方法

1.1 试验材料

2018年7月采自辽宁省清原县境内的野生大花卷丹，选取健康的，无病虫害的植株，以鳞茎作为试验材料。

1.2 试验方法

将鳞茎表面污垢用洗衣粉水清洗干净，将鳞片剥下，放到流水下冲洗20～30 min，然后放入75%乙醇溶液中浸一下捞出，用无菌水冲洗后滤纸吸干表面水分。将鳞茎切成1 cm见方的小块，再放入0.1%的氯化汞溶液中消毒3～5 min，无菌水冲洗3～4遍，将鳞茎块四周接触氯化汞的边缘各切掉0.2 cm左右，接种到诱导培养基中。15～20 d以后将诱导出的不定芽切下，接种到增殖培养基中，30 d后待小鳞茎长到一定大小接种到生根培养基中，45 d左右练苗移栽。

1.3 培养基的选择

1.3.1 诱导培养基配方

以MS为基本培养基，添加6-BA(0.1、1.0 mg/L)和KT(0.1、1.0 mg/L)分别与NAA(0.01、0.1、0.5 mg/L)组合，添加蔗糖40 g/L，琼脂5 g/L，pH调到5.8，将处理好的鳞茎块接种到诱导培养基中，每瓶接种一块。

1.3.2 增殖培养基配方

以MS为基本培养基，添加6-BA(0.1、1.0 mg/L)和NAA(0.01、0.1、0.5 mg/L)组合，添加蔗糖40 g/L，琼脂5 g/L，pH调到5.8，将诱导出的小鳞茎切下接种到增殖培养基中，每瓶接种2个。

1.3.3 生根培养基配方

以1/2MS为基本培养基，添加NAA(0.01、0.1、0.5 mg/L)，蔗糖30 g/L，将直径长到1 cm左右的小鳞茎接种到生根培养基中，每瓶接种4个。

1.3.4 移栽

待百合鳞茎长到直径2～3 cm，生有5～6条根时，即可进行移栽。移栽基质选择草炭、草炭∶蛭石1∶1、草炭∶河沙1∶1三种，15 d后统计成活率。

2 结果与分析

2.1 诱导培养基的选择

将处理好的鳞茎块接种到诱导培养基中，15 d以后鳞茎块边缘就会陆续有突起产生，KT与NAA组合的培养基上也会有不定芽产生，但有的鳞茎块会形成较多的瘤状突起物，6-BA与NAA组合的培养基易形成类似小鳞茎状的不定芽，但高浓度激素组合的培养基长出的不定芽易发生玻璃化情况，所以适合的诱导培养基激素组合是6-BA 0.1 mg/L，NAA 0.01～0.1 mg/L。

2.2 增殖培养基的选择

将不定芽接种到6-BA与NAA组合的增殖培养基中，各种激素组合的培养基芽都会有增殖，但低浓度的6-BA增殖的系数较小，高浓度的激素导致不定芽产生畸形，不 利 于 增 殖，适 合 的 芽 增 殖 激 素 组 合 为

6-BA 0.1 mg/L，NAA 0.01 mg/L。

表 1 不同浓度6-BA、KT与NAA组合对诱导不定芽的影响

表 2 不同浓度6-BA与NAA组合对不定芽增殖的影响

2.3 生根培养基的选择

部分小鳞茎在增殖的过程中会有少量的根长出，直接接种，7～15 d的时间就会有新的根系发出。以1/2MS为基本培养基，添加NAA浓度0.01～0.1 mg/L都可以有较高的生根率，当NAA达到0.5 mg/L时，生根率下降，所以高浓度的NAA不合适生根。

表 3 不同浓度NAA对鳞茎生根的影响

2.4 移栽基质的选择

移栽前先将培养瓶瓶口拧松，在温室内放置1 d，进行练苗，而后移栽。将移栽基质平铺到栽培框中，每种基质载50个鳞茎。15 d之后观察出苗率。草炭的出苗率最低，草炭∶蛭石1∶1、草炭∶河沙1∶1出苗率差不多，均可作为栽培基质。

表 4 不同栽培基质对鳞茎成活率的影响

3 结论与讨论

无论是大花卷丹不定芽诱导还是增殖，都需要低浓度的激素组合，不定芽的诱导适合的组合为6-BA 0.1 mg/L，NAA 0.01～0.1 mg/L。增殖的为6-BA 0.1 mg/L，NAA 0.01 mg/L。适合的生根培 养 基 为1/2MS，添 加NAA浓度0.01～0.1 mg/L。草炭∶蛭石1∶1或草炭∶河沙1∶1均可作为移栽基质，在生产中考虑到成本问题，可考虑草炭∶河沙1∶1作为栽培基质。鳞茎出苗后要注意加强病虫害的防治。