巩会杰，唐建荣，姚兰杰，冯鹏飞

青蒿琥酯通过miR-21/PTEN通路对人大肠癌CCL229细胞恶性生物学行为抑制作用的研究

巩会杰，唐建荣，姚兰杰，冯鹏飞

驻马店市中心医院 消化内科，河南 驻马店 463000

探究青蒿琥酯对人大肠癌CCL229细胞恶性生物学行为抑制作用的机制。采用MTT法检测青蒿琥酯对CCL229细胞活力的影响；通过流式细胞术检测青蒿琥酯对CCL229细胞凋亡的影响；采用Transwell法检测青蒿琥酯对CCL229细胞侵袭能力的影响；采用克隆形成实验检测青蒿琥酯对CCL229细胞集落形成能力的影响；采用Western blotting法检测青蒿琥酯对CCL229细胞内自噬特异性蛋白如自噬效应蛋白（Beclin1）、轻链3-Ⅰ/Ⅱ蛋白（light chain 3-Ⅰ/Ⅱ，LC3-Ⅰ/Ⅱ）、自噬相关蛋白5（autophagy related protein 5，Atg5）、Atg5-Atg12复合物以及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）相关蛋白如紧密连接蛋白（ZO-1）、上皮钙黏蛋白（epithelial cadherin，E-cadherin）、神经钙黏蛋白（neuronal cadherin，N-cadherin）、锌指转录因子（Slug）和第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN）表达的影响；采用qRT-PCR法检测青蒿琥酯对CCL229细胞内mRNA表达的影响；通过双荧光素酶报告基因实验验证与的靶向关系；考察过表达或抑制与对青蒿琥酯抑制CCL229细胞恶行生物学行为的影响。青蒿琥酯显著降低CCL229细胞存活率（＜0.05、0.01、0.001），显著促进CCL229细胞凋亡（＜0.001），显著抑制CCL229细胞侵袭和克隆形成能力（＜0.001），显著上调CCL229细胞内Atg5-Atg12复合物、Atg5、Beclin1、LC3-Ⅰ/Ⅱ、ZO-1、E-cadherin表达水平（＜0.05、0.01），显著下调N-cadherin和Slug蛋白表达水平（＜0.05）。CCL229细胞内mRNA高表达（＜0.01），青蒿琥酯显著抑制CCL229细胞内mRNA表达水平（＜0.05）。过表达显著抑制青蒿琥酯对CCL229细胞的促凋亡作用（＜0.001），显著减弱青蒿琥酯对CCL229细胞侵袭和克隆形成能力的抑制作用（＜0.01），显著抑制青蒿琥酯对CCL229细胞Atg5-Atg12复合物、Atg5、Beclin1、LC3-Ⅰ/Ⅱ、ZO-1、E-cadherin表达水平的上调作用（＜0.05、0.01），显著抑制青蒿琥酯对CCL229细胞N-cadherin和Slug蛋白表达水平的下调作用（＜0.01）；……