黄莎 杨建伟 高炜 师怡 张和军 林锦源 吴光峰 林鹭萍

李惠

结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是我国常见恶性肿瘤之一，其发病机制尚未完全明确，目前认为与多条信号传导通路有关[1]。研究发现，丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPK）信号通路的异常激活在CRC 发生发展过程中起重要作用[2]。目前在中国人群，针对MAPK 信号传导通路上KRAS、NRAS 及BRAF 基因状态与CRC 临床病理特征之间的关系认识并不充分。本研究通过检测分析370 例CRC 患者中KRAS、NRAS 及BRAF 基因常见位点突变情况，探索上述基因与临床病理特征之间的关系，为CRC 患者的综合治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

收集2018 年1 月—2020 年11 月在福建省肿瘤医院接受治疗的370 例CRC 患者。所有患者组织标本及临床病理资料完整。本研究已获得福建省肿瘤医学伦理委员会批准。

1.2 KRAS、NRAS 及BRAF 基因突变检测

用试剂盒DNA FFPE Tissue Kit 提取结直肠癌组织DNA，采用PCR 扩增，用直接测序法检测KRAS、NRAS 及BRAF 基因突变。

1.3 错配修复（MMR）蛋白表达检测

使用BenchMark ULTRA 全自动免疫组化仪进行MMR 蛋白（MLH1、MSH2、MSH6、PMS2）检测，所用试剂均为福州迈新生物技术开发有限公司生产。MLH1、MSH2、MSH6、PMS2 均表达为（+）判为pMMR，而MLH1、MSH2、MSH6、PMS2 中任意一种表达为（-）则判为dMMR。

1.4 统计学分析

采用SPSS 25.0 版软件处理数据。采用χ2检验或Fish 精确概率法分析基因状态与临床病理特征的关系。P＜0.05 差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 临床病例资料

370 例CRC 患者中，男性236 例，女性134 例，年龄25 ～83 岁；右半结肠癌103 例，左半结肠癌及直肠癌267 例。

2.2 KRAS、NRAS 及BRAF 基因突变频率及类型

370 例CRC 患者中，KRAS 基因突变率最高，突变患者155例（41.9%），其中第2、3、4 外显子突变例数分别为138 例（89.0%）、8 例（5.2%）、9 例（5.8%）。其中KRAS 基因第2 外显子第12 密码子突变107 例，第13 密码子突变31 例；……