李殿明，柳兆飞，宁国兰

肺癌是目前发病率与病死率最高的恶性肿瘤，死亡率高主要是由于绝大部分病人确诊时已属中晚期，5年生存率极低[1]。因此，肺癌的早期诊断和有效的治疗方法是改善预后和提高生存率的关键。近年来，一些研究发现微小RNA(microRNA，miRNA)能调节多种肿瘤的发生、发展及转移等[2]。循环miRNAs可作为肺癌诊断标记物[3]，还可在预测肿瘤治疗反应、疗效评价[4]及预后[5]等方面起到重要作用。

miRNA广泛存在于真核生物中，是一种在进化中高度保守的短链非编码RNA[6]。let-7是人体内第一个被发现的miRNA，包含13个成员：let-7-a-1/2/3，let-7-b，let-7-c，let-7-d，let-7-e，let-7-f-1/2，let-7-g，let-7-i，mir-98和mir-202[7]。let-7家族是目前研究最多的miRNA之一，研究[8-10]发现其在多种肿瘤中表达下调，可能作为癌基因或抑癌基因参与肿瘤的发生、发展。关于let-7与肿瘤的研究大多集中在let-7a和let-7b上，关于let-7c的研究较少，而且let-7a1和let-7c共同在肺癌中的研究，至今未见报道。

本研究通过检测肺癌组织、癌旁正常组织和良性肺疾病组织中let-7a1和let-7c基因的表达，分析两者与肺癌发生、发展的相关性，探讨其在肺癌发生中可能的分子机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.2 主要试剂 Trizol试剂 (Invitrogen公司)；RNA保存液[(天根生化科技(北京)有限公司)；DAB显色试剂盒(福州迈新生物技术公司)]；EB(北京天根生化科技有限公司)；All-in-OneTMmiRNA qRT-PCR检测试剂盒(广州复能)；let-7a1、let-7c基因引物、U6内参引物(广州复能)；SuperScript Ⅲ反转录试剂盒(ABI-invitrogen)；Sybr qPCR 试剂盒(ABI-invitrogen)。

1.1.3 主要仪器 超净工作台(苏州市净化设备有限公司)；Finnpipette各型移液器(芬兰ABI-invit rogen)；7500型PCR仪(美国 ABI 公司)；AlphaView图像分析软件(美国Alpha公司)；Eppendor 5810R型冷冻高速离心机(德国Eppendorf 公司)；琼脂糖水平电泳槽(美国Bio-Rad公司)；……