闫慧，李鹏，韩素丽，杜园园，杜薇，陈腊，段刘梦，李曼，李锦豪

(1.长治医学院附属和平医院，山西 长治 046000；2.长治医学院，山西 长治 046000)

乙型肝炎病毒(HBV)是一种嗜肝脱氧核糖核酸病毒，属于包膜病毒。现用于临床的病毒标志物有乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗体(抗-HBe)、乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HBc)[1]。目前，临床实验室检测此类标志物常用的方法有酶联免疫法和化学发光法等[2]。近几年，国产化学发光仪在检测性能上与传统的进口化学发光仪缩小了差距。本文通过评价亚辉龙iflash3000A型化学发光仪对HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc等项目的检测性能，并与雅培i2000化学发光仪进行结果间的比对，验证iflash3000A的检测能力。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

亚辉龙iflash3000A化学发光仪及配套乙型肝炎血清标志物试剂：HBsAg(试剂批号：20190201)、抗-HBs(试剂批号：N1081481/N0596194)、HBeAg(试剂批号：N0596046)、抗-HBe(试剂批号：B32541/B32541)、抗-HBc(试剂批号：B31945/B31945)。试剂均在有效期内使用。

1.2 样本采集

随机选取门诊及健康体检者血清样本。无菌操作抽取静脉血4 mL于无抗凝剂采血管中，静置30 min后3 000 r/min离心10 min，取上清液待测。剔除溶血、脂血、黄疸等可能干扰反应结果的样本。

1.3 方法

1.3.1 精密度验证

1.3.2 分析测量范围验证

用测量范围下限低值样本(L)等间距稀释测量范围上限的高值样本(H)，制备出6个不同浓度样本，每份样本重复测定2次，计算出测定均值，与理论浓度计算出线性回归方程：y=ax+b，并计算线性相关系数r。判定标准：a为0.97～1.03，线性相关系数r≥0.975(或r2≥0.95)[4]。

1.3.3 正确度验证

正确度评价通过方法学比对来实现，利用两种方法的比对结果进行iflash3000A检测系统的正确度评估。挑选40个新鲜血清样本，样本浓度在方法学的分析测量范围内，并覆盖医学决定水平。将挑选的40个样本随机顺序排列，分别在雅培i2000检测系统(该仪器参加卫生健康委员会临检中心室间能力评价)和iflash3000A检测系统上完成测试。判定标准为符合率≥80%[5]。

1.3.4 携带污染率验证

按厂家声明的iflash3000A标准验证方法，将分析测量范围内高浓度的新鲜血清样本在仪器上测试两次后取平均值，分装后放置于1，2，3杯位置(H1，H2，H3)；再取去离子水或生理盐水放置于4，5，6杯位置(L1，L2，L3)。以上6份标本按顺序连续进行检测(从1到6)为一组，重复测定5组，计算携带污染率，携带污染率=(CL1-CL3)/(CH3-CL3)。判定标准：5组检测的携带污染率均≤10-6。

1.4 统计学方法

采用SPSS19.0软件对精密度和分析测量范围的数据进行统计分析。

2 结 果

2.1 精密度验证

各项目批内精密度和批间精密度验证结果均符合试剂说明书和CLSI EP15-A2文件要求，批内精密度均≤7.5%，批间精密度均≤10%，结果见表1。

表1 批内和批间精密度(n=20)验证结果

2.2 分析测量范围验证

因本研究的五个项目中，只有HBsAg和抗-HBs是定量分析项目，所以只对其检测范围进行了验证，a在0.97～1.03范围内，线性相关系数r均≥0.975(见表2)。

表2 检测项目的测量范围验证结果

2.3 正确度验证

将iflash3000A 5个项目的检测结果与i2000比对，总体符合率均≥80%，结果表明满足正确度要求(见表3)。

表3 正确度验证结果

2.4 携带污染率验证

HBsAg的携带污染率通过发光值表示，5组的携带污染率分别为2.0338×10-7，2.0338×10-7，0，2.0338×10-7，0，结果均≤10-6，满足要求。

3 讨 论

我国属于乙型肝炎的高发国家，HBV感染后，在肝细胞内进行复制，造成局部损伤。目前临床主要采用血清标志物检测来分析和判断患者的病情及传染性，HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc是临床用来检测HBV感染的重要血清学指标，能为乙型肝炎患者的病情判断与病毒复制提供科学合理的依据[6]。iflash3000A化学发光仪利用抗原抗体反应的特异性和吖啶酯发光剂增强检测信号的原理，实现对HBV血清标志物的自动化、快速化检测。我们对iflash3000A化学发光仪进行了检测项目的性能评价，以保证检测结果的准确性、可靠性。本次试验按照厂家声明，参考CLSI系列文件对HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc等项目的精密度、分析测量范围、正确度、携带污染率等进行验证，结果表明，iflash3000A化学发光仪基本可以满足实验室对以上项目检测能力的要求。精密度验证试验中，5个检测项目的批内精密度的低值和高值水平均满足CV≤7.5%；批间精密度的低值和高值水平均满足CV≤10.0%。但需要注意的是，低值标本如浓度过低时，会出现CV异常增大的情况，应注意避免此类情况发生。分析测量验证试验中，HBsAg和抗-HBs的实际测量值与理论预期值线性回归曲线满足a在0.97～1.03内、r2≥0.95的要求。在临床实际工作中，HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc是按照定性试验发放报告的，但iflash3000A化学发光仪可对HBsAg和抗-HBs的发光信号值进行连续监测，其分析测量范围的验证仍是必须完成的。正确度验证试验中，按照定性试验正确度验证规则，对40 例阴性和阳性样本进行的符合率验证结果表明，iflash3000A检测系统的定性结果与参与卫生健康委员会临床检验中心能力比对的雅培i2000检测系统的结果具有一致性，5个项目的符合率均≥80%，能够满足正确度验证的要求。携带污染率验证试验中，通过对HBsAg携带污染率进行的5组验证数据结果表明，iflash3000A的携带污染率较低，均≤10-6，可以有效避免样本因含量不同造成的结果假阳性情况。