张保德，宗少晖

（广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科，南宁 530021）

全球每年有数百万例患者接受关节置换术，且呈逐年递增趋势。人工关节置换术是治疗各种终末期骨性关节病最普遍、有效的方法，但随着假体植入时间的延长，假体发生磨损，导致不同程度的磨损微粒产生，是局部骨溶解、炎性假瘤及假体无菌性松动（aseptic loosening,AL）的主要原因[1-3]。研究发现，破骨细胞性骨质溶解和骨吸收继发于巨噬细胞吞噬/胞饮磨损颗粒后所引发的机体免疫反应[4-6]。据报道，磨损微粒通过刺激巨噬细胞等炎性细胞释放大量化学介质，促进破骨细胞前体细胞向破骨细胞分化，抑制破骨细胞凋亡，增强骨吸收破骨细胞活性，使假体周围发生骨溶解[2,6-10]。本实验旨在通过建立聚甲基丙烯酸甲酯（polymethyl methacrylate，PMMA）颗粒骨吸收动物模型来研究敲除破骨细胞3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1（3-phosphoinositide-dependent kinase 1，PDK1）基因对PMMA 颗粒诱导颅骨骨溶解、破骨细胞形成及骨吸收活性的影响，为临床治疗和预防人工假体周围骨溶解导致的无菌性松动提供新的理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级C57BL/6雄性8周龄野生型小鼠12 只，由广西医科大学实验动物中心提供（动物生产许可证号：SYXK 桂2020-0004）。破骨细胞敲除PDK1 基因C57BL/6 雄性小鼠6 只，本课题组自行繁育所得，称重并标记。温度（23±2）℃，相对湿度（50±10）%。

1.2 PMMA 颗粒的制备 PMMA 颗粒购自美国Polysciences 公司，形态规则、微球形，直径1～10 μm，经扫描电镜（HITACHI Regulus 8100）检测证实颗粒平均直径6.0 μm，95%颗粒直径＜10 μm。将颗粒溶于75%乙醇，室温下振荡清洗4 次，每次1 h，100%乙醇浸泡灭菌，12 h 后用PBS 清洗4 次，每次1 h，将处理后的PMMA 颗粒重悬于无血清α-MEM培养基中，配成浓度为30 g/L的溶液，于4 ℃冰箱中保存备用[11]。……