丁露 宋思雨 李雅馨 李香艳 王泽玉

(长春中医药大学 1中西医结合学院，吉林 长春 130117；2吉林省人参科学研究院)

肺纤维化是由多种病因引起的累及肺泡、肺间质、细支气管的慢性、弥漫性、间质性肺疾病，患者中位生存期平均3～5年，死亡率较高；目前主要以对症治疗为主〔1，2〕。肺泡上皮细胞在转化生长因子(TGF)-β1诱导下导致细胞过度增殖和上皮间质转化(EMT)〔3〕，并伴有平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)过度表达；上述病理过程在肺纤维化形成中起决定性作用〔4，5〕。基于“久病入络”理论和多年临床实践，在经方补阳还五汤基础上加减化裁为温肺补气通络方(WFBQTL)，多年临床应用已证实该方具有抗炎、止咳、平喘、化痰的作用〔6〕，但对肺泡上皮细胞增殖及间质化的影响尚不清楚。本研究在TGF-β1诱导的肺腺癌A549细胞模型上，探讨WFBQTL对细胞增殖及EMT的作用机制。

1 材料与方法

1.1细胞 Ⅱ型肺泡上皮细胞来源人非小细胞腺癌A549细胞，来源于中国科学院上海细胞生物研究所细胞库。

1.2试剂与用药 WFBQTL组成为黄芪、黄芩、丹参、虎杖、当归、川芎、地龙、连翘、紫苑、款冬花、姜半夏，购自长春中医药大学附属医院。胎牛血清(Clark，美国)；RPMI1640培养基(Gibco，美国)；10倍磷酸盐缓冲液(PBS，碧云天)；胰酶、青链霉素双抗(勃林格殷格翰生物药业)；TGF-β1(Sigma，美国)；甲基偶氮唑蓝(MTT)粉末(索莱宝公司)；抗体E-钙黏蛋白(cadherin)、N-cadherin、Collagen Ⅰ、α-SMA、羊抗兔IgG、羊抗鼠IgG(Abcam，英国)、TRIzol试剂(Invitrogen，美国)、逆转录试剂盒(天根公司)和PCR引物(上海生工)。

1.3实验仪器 CO2培养箱、酶联免疫检测仪(Thermo Fisher Scientific，美国)；蛋白电泳仪、转膜仪、荧光实时定量PCR仪(Bio-Rad，美国)；可视相差倒置显微镜(奥林普斯，日本)、多色荧光、化学发光凝胶成像系统(ProteinSimple，美国)。……