易 玲，黄志翔，谭 涛，向雅香

湖南省岳阳市中心血站，湖南岳阳 414000

红细胞血型系统在输血技术学中具有重要意义，目前已发现人类红细胞有36种血型系统，360种血型抗原[1]。红细胞血型系统具有高度的遗传多态性，不同民族和地区存在差异[2]。本研究采用聚合酶链式反应-序列特异性引物法(PCR-SSP法)对Duffy、Dombrock、Diego、Kidd 4种红细胞血型系统8个抗原基因进行分型，分析岳阳地区汉族人群血型抗原基因频率和多态性。

1 资料与方法

1.1一般资料 随机留取本血站2019年12月303份非血缘关系岳阳籍、汉族、ABO血型不限、RhD(+)固定献血者5 mL EDTA抗凝全血标本。年龄18～55岁，男131名，女172名。本研究经无偿献血者知情同意。

1.2仪器与试剂 仪器：离心机(Eppendorf公司，德国)；凝胶成像仪(Bio-Rad公司，美国)；PCR仪(Life technologies公司，美国)。试剂:EX-DNA Kit(天津TIANLONG公司，批号:E0819040131);人类Kidd(Jka/Jkb)、Duffy(Fya/Fyb)、Diego(Dia/Dib)、Dombrock(Doa/Dob)血型系统抗原基因分型检测试剂(天津吉诺泰普生物技术有限公司，批号:E20191009)。

1.3方法

1.3.1样本DNA提取 按TIANLONG EX-DNA Kit试剂说明书提取全血基因组DNA。

1.3.2PCR扩增及电泳 按照按照试剂盒说明书进行PCR-SSP法扩增。Kidd(Jka/Jkb)、Duffy(Fya/Fyb)、Diego(Dia/Dib)、Dombrock(Doa/Dob)血型系统PCR循环参数:96 ℃预变性2 min;96 ℃ 20 s,68 ℃ 60 s,5个循环;96 ℃ 20 s,65 ℃ 45 s,72 ℃ 30 s,10 个循环;96 ℃ 20 s,62 ℃ 45 s,72 ℃ 30 s,15个循环;72 ℃延长 2 min,4 ℃保存。PCR产物采用2.5%琼脂糖凝胶于电压140～150 V条件下电泳10～15 min,采用自动凝胶图像分析仪成像并记录电泳结果。

1.3.3PCR-SSP法结果判定 每个PCR反应都产生强弱不一的1 009 bp内对照产物。根据有无PCR产物及产物长度按表1指定相应血型基因。在相应碱基对位置观察有无特异性条带，若出现特异性条带判读为阳性，未出现则判断为阴性。

1.4统计学处理 应用SPSS24.0统计软件进行数据分析。按基因计数法计算基因频率，计算观察值和期望值，采用χ2检验分析基因分布是否符合Hardy-Weinberg平衡法则，按参考文献[3]计算抗原不配合率。……