赵世明，王美玲，律凤霞

（牡丹江师范学院生命科学与技术学院，黑龙江 牡丹江157012）

稻瘟病是水稻栽培中的重要病害之一，中国南北稻区均有稻瘟病发生［1］，病害流行地区轻则减产10%～50%，严重罹病的稻田甚至绝收［2］。稻瘟病在水稻的各个时期及各个部位均有可能发病，尤其是棚内育苗期、插秧后分蘖、抽穗初期更易感病［3-5］。植物病害的防治应做到以防为主治疗为辅，最大限度规避化学防治，减少农药残留，有利于消费者身体健康，有利于有机农业的良性循环和健康发展［6，7］。而分离纯化获得植物病原菌纯培养物，是了解该病原菌生物学特性和生态学习性的前提，是植物病害防控及抗病育种的基础［8-11］。本研究从牡丹江市不同水稻栽培地采集疑似感染稻瘟病的水稻叶片，用PDA培养基进行病原菌纯化初培养，通过观察菌落黑色素产生及分生孢子的形态进行初筛鉴别；采用CTAB法提取菌丝DNA，以稻瘟病菌特异引物进行PCR扩增，对扩增产物进行测序及NCBI网站比对验证，获得纯化后的病原稻瘟菌。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验材料疑似感染稻瘟病菌的水稻叶片，栽培稻田采集；DNA提取试剂盒为QIAGEN公司产品；PCR试剂盒为宝生物工程有限公司产品；琼脂糖为Sigma公司产品；其他常用试剂为国产分析纯。

1.1.2 试验仪器双面超净工作台、恒温光照培养箱、全自动高温蒸汽灭菌锅、PCR仪，以及试管、酒精灯、烧杯、锥形瓶、培养皿等。

1.2 方法

1.2.1 稻瘟病病叶采集从牡丹江市6个不同水稻栽培地调查患稻瘟病的水稻植株，采集病害症状表现明显的叶片及稻穗带回备用，观察并记录叶片患病症状。……