蔡骁垚，林堃银，孙 涛，张 立，闫佩毅，金 姝，

1.同济大学附属普陀人民医院中心实验室，上海200060；2.同济大学附属普陀人民医院检验科，上海200060

金黄色葡萄球菌是一种重要的致病菌，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin resistant Staphylococcus aureus，MRSA）在金黄色葡萄球菌中的分离率已超过40%［1-2］，无菌体液中MRSA培养阳性可以作为MRSA感染的诊断依据。痰标本作为非侵入性标本，其检测对病原学诊断有重要参考意义［3］。因此，痰标本MRSA培养阳性对感染诊断也有重要的参考意义［4］。痰液培养的周期为48～72 h；即便是质谱技术，也需要培养出菌落才能进行质谱鉴定，需时约24 h。聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）可以在数小时内获知是否有MRSA基因的存在，其检测结果早于细菌培养结果；但是，临床对于痰标本MRSA 的PCR 检测结果的指导意义尚不清楚［5］。本研究中，我们定量检测痰标本中MRSA 的耐药基因mecA、金黄色葡萄球菌种基因Sa442，同时进行痰标本的培养，分析定量PCR（quantitative PCR，qPCR）检测结果与细菌培养结果的关联；并通过对耐药基因的定量检测预判细菌培养结果，便于更早期地指导临床诊疗工作。

1 材料与方法

1.1 菌株、试剂及引物

收集2017 年5 月—2018 年5 月同济大学附属普陀人民医院入院送检的痰标本，共筛选出1 775 例合格痰标本。标准菌株ATCC33591，购于美国典型培养物保藏中心（American Type Culture Collection，ATCC），为MRSA标准菌株，常用于抗菌药物研发；细菌基因组DNA 提取试剂盒（DP302）购于天根生化科技（北京）有限公司；UNG 酶和Premix Ex TaqTM（2×）购自瑞士罗氏公司；引物和探针均由上海基康生物技术有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 痰细菌培养鉴定 挑取痰标本的脓性部分涂片，革兰染色，显微镜观察，平均每个低倍（10×）视野下鳞状上皮细胞数＜10 个、白细胞＞25 个为合格痰标本。……