（石家庄医学高等专科学校 河北 050000）

高效液相色谱法（HPLC）是在经典液相色谱的基础上引入气相色谱法的塔板理论和速率理论，逐步发展起来的一种分离分析方法。高效液相色谱法最大的优势是分离混合物中各种组分，相较于经典液相色谱法，HPLC中加入了高压泵，而且固定相颗粒比经典液相色谱法固定相颗粒直径要小且均匀，从而提高了分离分析的速度，通常分离分析仅需要几分钟到几十分钟。相较于气相色谱法来说，高效液相色谱法可用于热不稳定物质的分离分析。由于分离分析速度快，分离效果好等优点，在农业、医学、工业、检验等各领域，高效液相色谱法都有着十分广泛的应用。

1.高效液相色谱法测定条件的选择

HPLC在分离混合物时，如何选择色谱条件，决定着分离效果。HPLC色谱分离条件的选择主要以塔板理论和速率理论作为指导，包括色谱柱规格的选择、固定相和流动相的选择、柱温的控制、流动相流速控制等。

(1)色谱柱规格的选择

色谱柱规格主要包括柱长，柱内径以及固定相颗粒直径。

高效液相色谱柱柱内径的规格有2.1mm、3mm、4.6mm等，但目前最常用的是4.6mm。其它条件相同情况下，色谱柱内径越大，能分离样品的量越大，得到的峰形越好，对高效液相色谱仪器中的死体积敏感性越低，柱效相对也会高一些，但内径越大，在相同流速下，会消耗更多的溶剂。

综上所述，在色谱柱规格选择上，要进行综合考量。

(2)固定相和流动相的选择

固定相和流动相选择合理，才能使混合物中各组分得到较好的分离效果。……